缺氧誘導(dǎo)因子-1α和M2型丙酮酸激酶在膽管癌細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)糖酵解的影響.pdf

1、目的：探討應(yīng)用缺氧誘導(dǎo)劑氯化鈷誘導(dǎo)的缺氧條件下，人膽管癌QBC939細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子-1α（Hypoxia Inducible Factor-1α，HIF-1α）、M2型丙酮酸激酶（M2 Pyruvate Kinase Deficiency，PK-M2）的蛋白表達(dá)變化情況，同時(shí)應(yīng)用HIF-1抑制劑3-（5’-羥甲基-2’-呋喃基）-1-苯甲基吲唑（YC-1）處理人膽管癌QBC939細(xì)胞，觀察YC-1對(duì)HIF-1α的抑制效果及對(duì)腫瘤糖酵

2、解效應(yīng)的影響及其機(jī)制。
　　方法：不同濃度氯化鈷溶液（0、100、150、200、250μmol/L）誘導(dǎo)的缺氧條件下，培養(yǎng)膽管癌QBC939細(xì)胞24小時(shí)及相同濃度氯化鈷溶液（150μmol/L）誘導(dǎo)的缺氧條件下，培養(yǎng)膽管癌QBC939細(xì)胞不同時(shí)間段（6、12、24、48h），并設(shè)置各缺氧條件下加入 YC-1溶液（150μmol/L）共同培養(yǎng)的各加藥組，應(yīng)用蛋白印跡技術(shù)定量測(cè)定HIF-1α及PK-M2的蛋白表達(dá)情況；分光光度法檢測(cè)

3、24h組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中乳酸濃度變化。
　　結(jié)果：①氯化鈷誘導(dǎo)的缺氧條件下，QBC939細(xì)胞中HIF-1α和PK-M2的表達(dá)隨氯化鈷濃度的增高及缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高（P<0.05），其中HIF-1α的表達(dá)在150μmol/L氯化鈷分組和缺氧12h組表達(dá)達(dá)到高峰。②不同濃度氯化鈷誘導(dǎo)的缺氧條件下培養(yǎng)QBC939細(xì)胞24h后，乳酸分泌量隨氯化鈷濃度的增高而逐漸升高，與常氧組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。③150μmol/

4、L YC-1和氯化鈷共同培養(yǎng)QBC939細(xì)胞條件下，HIF-1α和PK-M2的表達(dá)均有一定程度的下降。其中HIF-1α的表達(dá)在150、250μmol/L氯化鈷分組和12、24、48h缺氧組中均明顯下降，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而 PK-M2的表達(dá)在100、150、200μmol/L氯化鈷組和6、24、48h缺氧組中明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。④150μmol/L YC-1和不同濃度氯化鈷共同培養(yǎng) QBC939細(xì)胞

5、24h后，在100、150、200、250μmol/L氯化鈷組中，QBC939細(xì)胞的乳酸分泌量均明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：①缺氧可以上調(diào)人膽管癌QBC939細(xì)胞中HIF-1α、PK-M2的蛋白表達(dá)，PK-M2與HIF-1α的表達(dá)呈正相關(guān)，共同參與膽管癌細(xì)胞糖酵解水平的提高。② YC-1能有效地抑制膽管癌 QBC939細(xì)胞中 HIF-1α因子的活性，進(jìn)而抑制PK-M2的蛋白表達(dá)，有效地降低膽管癌細(xì)胞的糖