缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）反義寡核苷酸對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、背景：近年來，隨著在惡性腫瘤方面的研究不斷深入，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)是介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞缺氧適應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，并可在基因水平上直接調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子(VGEF)的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤生長。通常，生長較快的腫瘤，其間質(zhì)血管多較豐富而纖維結(jié)締組織較少，生長緩慢的腫瘤其間質(zhì)血管則較少。如果沒有新生血管供應(yīng)營養(yǎng)，腫瘤達(dá)到1～2nm的直徑或厚度即10<'7>個(gè)細(xì)胞左右將不再增大，因此誘導(dǎo)新生血管生成就成為惡性腫瘤生長、侵

2、襲、轉(zhuǎn)移的前提條件之一。腫瘤細(xì)胞的過度增生，而血管生長相對(duì)不足引起新生瘤細(xì)胞局部相對(duì)缺氧，缺氧又反饋性的刺激VEGF表達(dá)，促使血管增生為腫瘤進(jìn)一步發(fā)展創(chuàng)造條件。 目的：研究缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)反義寡核苷酸對(duì)人宮頸癌Hela體內(nèi)生長的影響，觀察其對(duì)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)的影響，為宮頸癌的發(fā)病機(jī)理研究提供新的思路與方法，為進(jìn)一步探討是否可通過反義寡核苷酸阻斷HIF-1α的表

3、達(dá)，抑制VEGF蛋白的表達(dá)，從而達(dá)到為治療宮頸癌提供重要理論依據(jù)的目的。 方法：采用裸鼠移植瘤模型，將宮頸癌細(xì)胞株Hela制備成濃度為1×10<'8>的細(xì)胞懸液，種植于18只4～6周齡裸鼠肩部皮下，待腫瘤長至直徑達(dá)1.0 cm(約20天左右)時(shí)，18只裸鼠隨機(jī)分為3組(每組6只)：對(duì)照組(A組)、正義治療組(B組)、反義治療組(C組)，分別注射生理鹽水，HIF-1α正義寡核苷酸和HIF-1α反義寡核苷酸。注射劑量：100μg/次

4、。用100μl生理鹽水稀釋后，在瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射，每3天重復(fù)注射一次，共8次。注射藥物后，每天觀察腫瘤生存狀態(tài)，每3天用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的最長徑(a)和最短徑(b)，計(jì)算腫瘤的體積(V，V=1/67πab<'2>)，繪制皮下腫瘤生長曲線。治療4周后處死裸鼠，測(cè)定腫瘤的重量和體積并計(jì)算腫瘤抑制率，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)種植瘤內(nèi)VEGF和HIF-1α的變化。所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS11.0系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)分析軟件包進(jìn)行處理。結(jié)果： 1、裸鼠體內(nèi)抑瘤

5、實(shí)驗(yàn)顯示，缺氧誘導(dǎo)因子-1 α(HIF-1α)反義寡核苷酸(asHIF-1α)有明顯的抑瘤作用，腫瘤生長曲線減緩，體積抑制率為33﹪、瘤重抑制率為54﹪(P<0.05)： 2、免疫組化檢測(cè)顯示，反義治療組種植瘤內(nèi)HIF-1α蛋白含量顯著降低(P<0.05)； 3、免疫組化檢測(cè)顯示，反義治療組種植瘤內(nèi)VEGF蛋白含量顯著降低(P<0.05)。 結(jié)論： 1、缺氧誘導(dǎo)因子-1α反義寡核苷酸對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物荷瘤生長(體