單增李斯特菌在群體感應(yīng)抑制劑作用下的生物學(xué)特性研究及其快速檢測(cè)技術(shù)的開發(fā).pdf

1、單核細(xì)胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM），簡稱單增李斯特菌，是一種常見的食源性致病菌，極易在食品或加工環(huán)境中殘留，從而引起各種動(dòng)物源性冷藏食品安全問題。因此，為了有效預(yù)防控制LM的感染，提高LM檢測(cè)效率，本文初步探究了群體感應(yīng)抑制劑對(duì)LM菌落生長、生物膜形成以及LM侵染細(xì)胞的影響，并建立一種快速高效檢測(cè)LM方法。主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下：
　?。?）通過測(cè)定菌落生長曲線、細(xì)菌總蛋白含量、胞外多糖含量變化

2、規(guī)律，并通過結(jié)晶紫染色法及掃描電鏡觀察生物膜形態(tài)，研究群體感應(yīng)抑制劑3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮和6-氨青霉素烷酸對(duì)LM生物學(xué)特性的影響等。結(jié)果表明，3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮對(duì)LM的最小抑菌濃度(MIC)為25μg/mL，最低致死劑量(MBC)為400μg/mL；6-氨青霉素烷酸對(duì)LM的MIC為3.12μg/mL，MBC為100μg/mL。兩種群體感應(yīng)抑制劑在一定的工作濃度下，對(duì)LM的菌落的生長及生物膜形成均有著一定的調(diào)控作

3、用，且隨著抑制劑濃度的增加，調(diào)控作用逐漸增強(qiáng)。
　　（2）通過MTT檢測(cè)、乳酸脫氫酶含量檢測(cè)、細(xì)菌黏附率檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)，研究3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮和6-氨青霉素烷酸分別在MIC，5MIC，10MIC濃度下，對(duì)LM侵染細(xì)胞的影響。當(dāng)3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮濃度分別為MIC，5MIC，10MIC時(shí)，其對(duì)LM侵染Caco-2細(xì)胞產(chǎn)生了一定的影響，黏附率抑制率分別為44.41％，67.68%和85.28；而在6-氨青霉素烷酸

4、作用下，最終的黏附抑制率分別為12.17%，59.60%和76.51%。結(jié)果表明：LM與Caco-2細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)，兩種抑制劑均對(duì)LM黏附Caco-2細(xì)胞有著明顯的抑制作用，且隨著抑制劑濃度的增加，抑制作用也逐漸增強(qiáng)。
　　（3）將LM毒力基因iap經(jīng)過原核克隆與表達(dá)，得到的表達(dá)產(chǎn)物p60蛋白作為免疫原免疫動(dòng)物制備多克隆抗體，通過抗體與磁珠的偶聯(lián)獲得抗LM免疫磁珠，建立一種免疫磁珠分離技術(shù)結(jié)合酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)LM方法。結(jié)果表明：建