二甲雙胍在3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)過(guò)程中對(duì)v-SNAREs蛋白家族mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中二甲雙胍對(duì)v-SNAREs mRNA表達(dá)變化，探討二甲雙胍在GLUT4轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　購(gòu)買3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至融合度達(dá)到100％或過(guò)融合時(shí)開(kāi)始誘導(dǎo)，予以誘導(dǎo)液誘導(dǎo)分化，A液3天、B液1天，交替3次，共12天，在誘導(dǎo)過(guò)程中，分別給予不同濃度二甲雙胍（0、0.5、1、2mmol/L)持續(xù)干預(yù)，第12天收集標(biāo)本。誘導(dǎo)成脂通過(guò)油

2、紅O染色鑒定。運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)脂肪細(xì)胞中AMPK、GLUT4、VAMP2、3、4、5、7、8的mRNA水平。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差異采用單因素方差分析，組間多重比較用LSD檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取?=0.05。
　　結(jié)果：
　　AMPK、VAMP4、VAMP7 mRNA結(jié)果以單因素方差分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GLUT4、VAMP2、3、5、8 mRNA結(jié)果以單因素方差分析達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，再行LSD檢驗(yàn)結(jié)

3、果：1）與0mmol/L組相比，0.5mmol/L組GLUT4、VAMP2、3、8 mRNA水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；2）與0mmol/L組相比，1mmol/L組GLUT4、VAMP2、3、8 mRNA水平上調(diào)，差異達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；3）與1mmol/L組相比，2mmol/L組GLUT4、VAMP2、3、8 mRNA水平下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　二甲雙胍可以作用于前脂肪細(xì)胞

4、誘導(dǎo)分化過(guò)程中，在1mmol/L濃度范圍內(nèi)，隨著二甲雙胍濃度增加，可以上調(diào)脂肪細(xì)胞中GLUT4、VAMP2、3、8 mRNA的表達(dá)，且具有一定的劑量依賴效應(yīng)。1mmol/L可能是二甲雙胍在3T3-L1前脂肪細(xì)胞作用的最大濃度。二甲雙胍可能通過(guò)調(diào)節(jié)v-SNAREs蛋白家族發(fā)揮對(duì)脂肪細(xì)胞GLUT4的轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)控。當(dāng)二甲雙胍濃度達(dá)到2mmol/L，則下調(diào)脂肪細(xì)胞中GLUT4、VAMP2、3、8 mRNA的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步探索二甲雙胍在GLU