促?；鞍讓?T3-L1脂肪細胞炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察不同種類、不同濃度的脂肪酸對3T3-L1成熟脂肪細胞胰島素刺激狀態(tài)和ASP刺激狀態(tài)下細胞炎癥因子（IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α）分泌水平的影響，以及對細胞炎癥信號因子（JNK1、IKKβ）蛋白表達的影響，以探討ASP對脂肪細胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法:
　　 1、采用經(jīng)典的激素“雞尾酒”法（誘導(dǎo)培養(yǎng)基由10μg/ml胰島素、0.5mmol/L 1-甲基3-異丁基黃嘌呤和

2、1.0μmol/L地塞米松配置而成），將3T3-L1前脂肪細胞誘導(dǎo)分化為3T3-L1成熟脂肪細胞，倒置顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細胞的形態(tài)學(xué)變化，油紅O染色觀察脂滴的聚集。
　　 2、3T3-L1成熟脂肪細胞給予油酸、棕櫚酸孵育過夜后，采用ELISE方法檢測ASP刺激以及胰島素刺激的IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α分泌水平。
　　 3、3T3-L1成熟脂肪細胞給予油酸、棕櫚酸孵育過夜后，采用Wester

3、n Blot法檢測ASP刺激以及胰島素刺激的JNK1、IKKβ蛋白表達。
　　 結(jié)果:
　　 1、3T3-L1前脂肪細胞表現(xiàn)為成纖維細胞樣的長梭形，胞漿中無脂滴；分化成熟后，細胞變圓、變大，可見明顯的脂滴圍繞胞核，呈典型“戒環(huán)”形狀。
　　 2、在脂肪酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗狀態(tài)下，ASP可以從不同程度上抑制IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1α分泌。油酸組顯著下調(diào)57％ MIP-1α的分泌(P＜0.05，1.

4、0 mmol/L），棕櫚酸組顯著抑制50％IL-6的分泌(P＜0.05，1.0 mmol/L）和48％ TNF-α的分泌(P＜0.05，1.0 mmol/L）。高濃度的油酸和棕櫚酸可以明顯抑制ASP刺激的JNK1蛋白表達，輕度抑制IKKβ的表達。油酸組JNK1的表達下降34％（P＜0.05，1.0 mmol/L），棕櫚酸組下降54％（P＜0.01，1.0 mmol/L）。
　　 3、在脂肪酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗狀態(tài)下，胰島素刺激的3

5、T3-L1脂肪細胞IL-6、TNF-α、MCP-1的分泌隨FFA濃度的升高呈下降趨勢，油酸組顯著增強MIP-1α的分泌178％ (P＜0.05，1.0 mmol/L），棕櫚酸組顯著抑制37％ MCP-1(P＜0.05，1.0 mmol/L）和51％ TNF-α分泌(P＜0.05，1.0 mmol/L）。與ASP刺激不同的是，胰島素刺激狀態(tài)下，油酸、棕櫚酸不影響JNK1和IKKβ的表達。
　　 結(jié)論:
　　 在脂肪酸誘導(dǎo)的