BRL37344對3T3-L1前體脂肪細胞分化的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　 肥胖與目前高發(fā)疾病如糖尿病和心血管疾病密切相關(guān)。目前觀點認為肥胖的原因不僅僅是脂肪組織的肥大，而且還有由前體脂肪干細胞分化為成熟脂肪細胞導(dǎo)致的脂肪組織增生。前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞是一個關(guān)鍵的過程，涉及特定基因和相關(guān)蛋白的協(xié)調(diào)表達。MEK/ERK信號通路是目前研究與脂肪細胞分化最為重要的信號通路之一。選擇性β3腎上腺素能受體激動劑(beta3-adrenergic receptor agonist，β3-AR

2、a)已被證明具有參與脂肪動員和產(chǎn)熱作用。BRL37344是一種選擇性β3腎上腺素能受體激動劑，在齲齒類動物相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)其具有促進脂肪分解和抗心律失常的作用，并且可以通過促進白色脂肪組織的脂肪分解及棕色脂肪組織的非戰(zhàn)栗產(chǎn)熱來促進能量釋放，調(diào)控能量平衡，為抗肥胖藥物的研究提供了新的選擇角度。本研究旨在通過觀察研究選擇性β3腎上腺素能受體激動劑BRL37344對3T3-L1小鼠前體脂肪細胞分化的影響，進一步探討B(tài)RL37344在前脂肪細胞分

3、化中的作用機制。
　　 方法：
　　 本研究以3T3-L1小鼠前體脂肪細胞作為研究對象，分別應(yīng)用BRL37344、MEK抑制劑PD98059、BRL37344+PD98059干預(yù)處理誘導(dǎo)分化的3T3-L1小鼠前脂肪細胞，以單獨應(yīng)用標準生脂培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化的前體脂肪細胞為對照組，另設(shè)標準生脂培養(yǎng)液+0.1％ DMSO作為DMSO對照組以排查0.1％ DMSO對前體脂肪細胞的毒性作用，48 h后換用含有上述新鮮配制干預(yù)藥物的維

4、持分化液，于誘導(dǎo)分化的第5d應(yīng)用油紅O染色技術(shù)鑒定前體脂肪細胞分化程度，裂解細胞、收集蛋白-80℃凍存?zhèn)溆?。為了進一步探討B(tài)RL37344與胰島素對ERK1/2信號通路早期刺激作用的異同，待前體脂肪細胞完全匯合24 h，并剝奪血清4h，分別用Insulin、BRL37344、Insulin+BRL37344、BRL37344+PD98059處理細胞60 min，分別于藥物刺激的0 min、5 min、10 min、60 min裂解細胞、

5、收集蛋白。
　　 通過Western blot蛋白印跡法測定pERK、tERK及脂肪細胞特異性分化轉(zhuǎn)錄因子(peroxisome proliferator-activated receptorγ2，PPARγ2)表達水平的變化。每組實驗重復(fù)3次以上，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，兩組均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.成

6、功誘導(dǎo)3T3-L1前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞。
　　 2.BRL37344能夠抑制前體脂肪細胞分化。
　　 3.3T3-L1前體脂肪細胞誘分化第5d，與對照組相比，BRL組及PD組PPARγ2表達明顯下調(diào)36.07％和45.08％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05); DMSO組及PD+BRL組PPARγ2表達與對照組比較無明顯差異(P＞0.05）;與對照組比較BRL組pERK1/2呈強性表達，是正常對照組的2.99倍

7、(P＜0.05)，其余三組與對照組比較均無明顯差異（P＞0.05）;對于tER蛋白表達，與對照組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05）。
　　 4.單獨應(yīng)用胰島素處理前脂肪細胞60 min，pERK1/2表達迅速增加，高峰出現(xiàn)在第5 min，是作用0 min的1.60倍(P＜0.05);單獨的BRL37344也促使ERK磷酸化，并且磷酸水平持續(xù)至少60 min，分別是0 min的1.60倍(P＜0.05)、1.46倍、1.69倍(P

8、＜0.05);當用胰島素及BRL37344同時處理細胞時，pERK1/2高水平表達并且持續(xù)時間長達60 min，分別是0 min的1.71倍(P＜0.05)、1.33倍、1.59倍(P＜0.05);ERK1/2上游激酶MEK特異性抑制劑PD98059可以抑制BRL37344誘發(fā)的ERK磷酸化，作用高峰出現(xiàn)在第5 min，是0 min的2.12倍(P＜0.05)，隨后ERK的活化水平迅速下降。
　　 結(jié)論：
　　 1.成功

9、建立3T3-L1前體脂肪細胞分化模型。
　　 2.BRL37344可以抑制3T3-L1前體脂肪細胞的分化。
　　 3.BRL37344可顯著增強ERK1/2的活化效應(yīng)，下調(diào)3T3-L1前脂肪細胞分化過程關(guān)鍵因子PPARγ2表達水平，這可能是其抑制前脂肪細胞分化及抗肥胖的作用機制。
　　 4.PD98059能夠特異性阻斷ERK1/2激酶MEK對ERK1/2的磷酸活化，部分改善BRL37344對PPARγ2表達的下調(diào)