檳榔堿對3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：
　　采用不同濃度的檳榔堿處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞，觀察它對脂肪細(xì)胞分化的影響，并初步探討其機(jī)制。
　　方法：
　　(1)采用MTT(噻唑藍(lán), Methylthiazolyl tetrazolium)法檢測檳榔堿對3T3-L1前脂肪細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。
　　(2)用傳統(tǒng)的“雞尾酒”法(即含胰島素、地塞米松和異丁基甲基黃嘌呤(isobutyl methyl xanthine, IBMX)的混合誘導(dǎo)劑)將3T

2、3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化，在誘導(dǎo)分化的第0天用或不用100μmol/L檳榔堿處理72h，于誘導(dǎo)分化的第9~11天，用油紅O染色，觀察拍照，并用異丙醇提取脂質(zhì)吸附的油紅O染料，測定OD值以定量脂質(zhì)含量。
　　(3)在誘導(dǎo)分化第3天和第11天，提取細(xì)胞的總RNA，RT-PCR檢測3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因表達(dá)，包括誘導(dǎo)分化早期基因 Pref-1(前脂肪細(xì)胞因子, preadipocyte factor1,)、C/EBPα和C

3、/EBPβ(CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α和β, CCAAT-enhancer binding protein-alpha and beta)，脂肪生成相關(guān)基因Fas(脂肪酸合成酶, fatty acid synthase,)、adrp(脂肪分化相關(guān)蛋白, adipose differentiation-related protein/adipophilin)和plin(圍脂滴蛋白, perilipin)，誘導(dǎo)分化成熟標(biāo)志基因PPARγ2(

4、過氧化物酶體增殖物激活受體, peroxisome proliferator-activated receptor gamma2)、Glut4(葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4, glucose transporter type4)。
　　結(jié)果：
　　(1)檳榔堿對3T3-L1前脂肪細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒性。在0-800μmol/L濃度范圍內(nèi)細(xì)胞相對存活率隨濃度增大而明顯降低，具有濃度依賴性。100μmol/L檳榔堿處理3T3-L1前脂肪細(xì)胞2

5、4h、48h、72h和96h，細(xì)胞存活率之間無明顯差異，約為70％。當(dāng)檳榔堿濃度≥200μmol/L時(shí)，檳榔堿處理48h、72h、96h細(xì)胞存活率均顯著低于24h，均小于20%，而48h、72h和96h之間的細(xì)胞活性無顯著性差異。
　　(2)油紅O染色顯示檳榔堿處理組(Are,100μmol/L Arecoline)中含有“戒環(huán)”樣脂滴成熟脂肪細(xì)胞的數(shù)目明顯少于對照組(Control,0μmol/L Arecoline)。脂肪細(xì)胞

6、脂質(zhì)含量定量結(jié)果顯示：檳榔堿處理組脂質(zhì)含量較對照組減少24.2%。
　　(3)100μmol/L檳榔堿對前脂肪細(xì)胞因子Pref-1基因表達(dá)無顯著影響，但可顯著降低誘導(dǎo)分化第3天和11天的C/EBPα和C/EBPβ基因表達(dá)。在誘導(dǎo)分化第3天和第11天，與對照組相比，檳榔堿處理組C/EBPα基因表達(dá)水平分別降低10.7%和7.6%；而C/EBPβ基因表達(dá)水平分別降低13.8%和40.5%。
　　(4)100μmol/L檳榔堿不影

7、響脂肪酸合成酶基因 Fas的表達(dá)，但顯著降低Adrp和plin的mRNA水平。在誘導(dǎo)分化第3天和第11天，與對照組相比，檳榔堿處理組Adrp基因表達(dá)水平分別下降17.8%和5.1%；而 plin基因表達(dá)水平分別下降9.2%和15.0%。
　　(5)隨著3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成熟，脂肪細(xì)胞分化成熟基因 PPARγ2和Glut4的表達(dá)水平顯著升高，但100μmol/L檳榔堿可顯著降低PPARγ2和Glut4的表達(dá)。在誘導(dǎo)分化第3天