鹽酸二甲雙胍對人成骨細(xì)胞增殖及Collagen Ⅰ、LRP5mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察不同濃度二甲雙胍對體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞增殖及Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討二甲雙胍對體外人成骨細(xì)胞作用的可能機(jī)制，為糖尿病骨質(zhì)疏松的患者在降糖藥物的選擇上提供有價值的用藥參考。
　　 方法：
　　 1、以成人股骨頸部松質(zhì)骨為材料，采用酶消化法體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞，觀察其形態(tài)并對其進(jìn)行功能鑒定。
　　 2、以人成骨細(xì)胞為體外實驗?zāi)Ｐ?，不同濃度的二甲雙胍(0、25

2、、50、100、200μ mol/L)刺激人成骨細(xì)胞72小時后，采用CCK-8比色法檢測細(xì)胞增殖情況，測定OD值。
　　 3、不同濃度的二甲雙胍(0、25、50、100、200μ mol/L)刺激體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞72小時后，用熒光定量RT-PCR法檢測Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá)。
　　 4、統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，實驗所得數(shù)據(jù)均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組總體上有無差別采用

3、單因素方差分析(one-wayANOVA)，組間兩兩比較采用LSD-t法檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、體外培養(yǎng)的人松質(zhì)骨成骨細(xì)胞顯微鏡下觀察呈梭形、紡錘形或不規(guī)則形，細(xì)胞表面有多個短突起，周圍細(xì)胞以突起相連;骨鈣素免疫組化法染色胞漿呈棕黃色;茜素紅染色呈紅色陽性鈣化結(jié)節(jié)。
　　 2、不同濃度的二甲雙胍(0、25、50、100、200μ mol/L)作用于人成骨細(xì)胞72小時后，各組

4、OD值均增高，且呈濃度依賴性，在200μ mol/L時增殖最明顯，對照組與實驗組，實驗組組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、采用熒光定量RT-PCR法檢測Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá)，結(jié)果顯示:不同濃度的二甲雙胍（0、25、50、100、200μ mol/L）可以促進(jìn)Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá)的能力，呈劑量依賴關(guān)系，在200μ mol/L表達(dá)最高，對照組與實驗組，實驗組組間比