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文檔簡介
1、目的:
觀察不同濃度二甲雙胍對體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞增殖及Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討二甲雙胍對體外人成骨細(xì)胞作用的可能機(jī)制,為糖尿病骨質(zhì)疏松的患者在降糖藥物的選擇上提供有價值的用藥參考。
方法:
1、以成人股骨頸部松質(zhì)骨為材料,采用酶消化法體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞,觀察其形態(tài)并對其進(jìn)行功能鑒定。
2、以人成骨細(xì)胞為體外實驗?zāi)P?,不同濃度的二甲雙胍(0、25
2、、50、100、200μ mol/L)刺激人成骨細(xì)胞72小時后,采用CCK-8比色法檢測細(xì)胞增殖情況,測定OD值。
3、不同濃度的二甲雙胍(0、25、50、100、200μ mol/L)刺激體外培養(yǎng)人成骨細(xì)胞72小時后,用熒光定量RT-PCR法檢測Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá)。
4、統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,實驗所得數(shù)據(jù)均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組總體上有無差別采用
3、單因素方差分析(one-wayANOVA),組間兩兩比較采用LSD-t法檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)果:
1、體外培養(yǎng)的人松質(zhì)骨成骨細(xì)胞顯微鏡下觀察呈梭形、紡錘形或不規(guī)則形,細(xì)胞表面有多個短突起,周圍細(xì)胞以突起相連;骨鈣素免疫組化法染色胞漿呈棕黃色;茜素紅染色呈紅色陽性鈣化結(jié)節(jié)。
2、不同濃度的二甲雙胍(0、25、50、100、200μ mol/L)作用于人成骨細(xì)胞72小時后,各組
4、OD值均增高,且呈濃度依賴性,在200μ mol/L時增殖最明顯,對照組與實驗組,實驗組組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
3、采用熒光定量RT-PCR法檢測Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá),結(jié)果顯示:不同濃度的二甲雙胍(0、25、50、100、200μ mol/L)可以促進(jìn)Collagen(Ⅰ)、LRP5mRNA表達(dá)的能力,呈劑量依賴關(guān)系,在200μ mol/L表達(dá)最高,對照組與實驗組,實驗組組間比
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