致康膠囊對葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結腸炎的作用及其機制研究.pdf

1、本文分為以下幾個部分:
　　第一部分:
　　目的:鑒定致康膠囊中主要化學活性成分及其具體含量。
　　方法:將0.4g致康膠囊粉末溶于50ml甲醇中，超聲作用40min,0.45um的濾器過濾2次，然后用于檢測分析。采用高效液相色譜的方法分析致康膠囊中的化學活性成分。質譜條件：流速1.0ml/min,色柱TC-C18（4.6×150mm,5um）,溫度30度。流動相包括甲醇（A）和水（B）。梯度洗脫條件：10-90％A，

2、60min;90%A,60-75min。上樣體積為10ul。檢測波長為270nm。
　　結果:鑒定出致康膠囊中十種主要的化學活性成分及其含量，分別是：三七素0.42mg/g,甘草酸0.37mg/g,歐前胡素0.041mg/g,黃連素4.58mg/g，異歐前胡素0.026mg/g,大黃酸0.40mg/g,蘆薈大黃素0.162mg/g,大黃素0.347mg/g,大黃酚0.617mg/g,大黃素-甲醚0.282mg/g.三七素來源于三七

3、。甘草酸來源于甘草。歐前胡素和異歐前胡素來源于白芷。黃連素來源于黃連。大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚和大黃素-甲醚來源于大黃。
　　結論:致康膠囊主要包含三七素,甘草酸,歐前胡素,黃連素，異歐前胡素,大黃酸,蘆薈大黃素,大黃素,大黃酚,大黃素-甲醚這十種重要的化學活性成分。
　　第二部分:
　　目的:研究致康膠囊對葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結腸炎的作用。
　　方法:用濃度為3%葡聚糖硫酸鈉喂養(yǎng)C57BL/6小鼠一周

4、來制造實驗性結腸炎模型。將60只小鼠隨機分成對照組、模型組、陽性藥物對照組、致康膠囊低劑量組、致康膠囊中劑量組和致康膠囊高劑量組一共六組來進行實驗。觀察小鼠的體重變化、大便及血便情況，并對每組小鼠進行疾病活動指數(shù)評分。評估小鼠結腸長度、結腸炎癥以及潰瘍情況。對小鼠結腸病理切片行HE染色，評估結腸腸上皮的損傷情況以及炎癥細胞浸潤情況，并對小鼠結腸行組織學活動度評分。應用生化試劑盒檢測小鼠結腸組織中髓過氧化物酶的活性。
　　結果:模型

5、組小鼠體重下降最快，致康膠囊干預組小鼠體重下降相比模型組緩慢；致康膠囊高劑量組體重下降相比致康膠囊低劑量組緩慢。模型組小鼠出現(xiàn)便血；致康膠囊高劑量組大便成形，無明顯出血；致康膠囊中劑量組大便不成形，帶血絲；致康膠囊低劑量組大便不成形，有血便。疾病活動指數(shù)評分在模型組最高（8.60±0.96）；在致康膠囊高劑量組明顯偏低（1.50±0.52）；致康膠囊低劑量組（7.40±0.96）和致康膠囊中劑量組（4.70±0.94）居中。模型組小鼠結

6、腸長度最短；陽性藥物對照組和致康膠囊高劑量組小鼠結腸長度明顯偏長；而致康膠囊低劑量組和致康膠囊中劑量組小鼠結腸長度居中。小鼠結腸病理切片HE染色提示模型組小鼠結腸上皮結構損傷明顯，且結腸炎癥細胞浸潤嚴重；應用致康膠囊干預的三組小鼠結腸上皮結構損傷相對偏少，結腸炎癥細胞浸潤程度相對減輕；且致康膠囊對結腸的保護作用呈現(xiàn)出劑量依賴性。小鼠結腸行組織學活動度評分顯示，模型組評分明顯偏高（4.80±1.03），致康膠囊高劑量組和中劑量組評分明顯偏

7、低（高劑量組：2.30±1.16；中劑量組：3.30±1.49）。對照組中小鼠結腸組織中髓過氧化物酶的活性最低，模型組中髓過氧化物酶的活性最高，而在陽性藥物對照組和致康膠囊干預組中髓過氧化物酶的活性均有不同程度的降低。
　　結論:致康膠囊對葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結腸炎有治療作用，能夠緩解小鼠結腸的炎癥、水腫和潰瘍，有利于結腸炎的恢復和好轉。
　　第三部分:
　　目的:探索致康膠囊治療葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結腸炎的潛在機制。

8、
　　方法:用3%葡聚糖硫酸鈉喂養(yǎng)C57BL/6小鼠一周來制造實驗性結腸炎模型。將60只小鼠隨機分成對照組、模型組、陽性藥物對照組、致康膠囊低劑量組、致康膠囊中劑量組和致康膠囊高劑量組共六組進行實驗。ELISA的方法檢測小鼠血清中TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-12,IL-4和IL-10等指標。生化試劑盒用于檢測SOD,MDA,NO和caspase-3等指標。免疫組化的方法檢測結腸iNOS,ICAM-1和NF-KB的表達

9、情況。WB的方法檢測結腸組織中TLR4，MyD88和TRAF6的蛋白表達水平。
　　結果:致康膠囊能明顯抑制促炎因子（TNF-α,IFN-γ,IL-1β和IL-12）的表達，增加抗炎因子（IL-4和IL-10）的表達。致康膠囊能增加SOD的活性，減少MDA和NO的含量，減少結腸組織中iNOS，ICAM-1和NF-KB的表達。另外，致康膠囊能抑制結腸組織caspase-3的活性，同時還能抑制MyD88依賴的TLR4信號通路的活性。<