一氧化碳抑制糖原合酶激酶3β信號(hào)傳導(dǎo)改善葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)結(jié)腸炎.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)主要探討一氧化碳（CO）通過抑制糖原合酶激酶3β（GSK3β）的信號(hào)傳導(dǎo)從而改善葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎的機(jī)制。
　　方法：首先將50只7周齡雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為兩批，每一批25只，隨機(jī)分為5組,即對(duì)照組、DSS組、DSS+CO組、DSS+LiCl組與CO組，每組5只。其中，DSS，DSS+CO以及DSS+LiCl組的小鼠飲用3％ DSS，6天后轉(zhuǎn)喂高壓滅菌水。而對(duì)照組與CO組始終飲用高壓滅菌水

2、。隨后我們將CO組與DSS+CO組的小鼠放入密閉箱使其吸入250ppm的一氧化碳，每日4小時(shí)，而對(duì)DSS+LiCl組的小鼠則每日施行腹腔內(nèi)注射氯化鋰（LiCl）200mg/kg。其中對(duì)第一批小鼠我們記錄其12天的生存率。而對(duì)于第二批小鼠，當(dāng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第10天，我們將小鼠處死并取出結(jié)腸做組織檢查與mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)分析。與此同時(shí)，從第二批小鼠的腸系膜和脛骨中提取淋巴結(jié)細(xì)胞與骨髓衍生巨噬細(xì)胞（BMMs），分析細(xì)胞中促炎性細(xì)胞因子的mRNA

3、與蛋白質(zhì)表達(dá)。在體外，我們主要培育U937人類單核細(xì)胞株與腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞（MLNs）。我們首先用一氧化碳釋放分子2（CORM2）和氯化鋰對(duì)這兩種細(xì)胞施行30分鐘的預(yù)處理，隨后通過30分鐘的脂多糖（LPS）刺激分析細(xì)胞中促炎性細(xì)胞因子的mRNA與蛋白質(zhì)的表達(dá)。
　　結(jié)果：在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，DSS組的小鼠生存率顯著下降，并在結(jié)腸組織，MLNs與BMMs細(xì)胞中促炎性細(xì)胞因子，如：腫瘤壞死因子（TNFα），誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）的

4、表達(dá)顯著增高。然而通過吸入一氧化碳，TNFα與iNOS的表達(dá)顯著減少，并且通過對(duì) GSK3β的第9位絲氨酸殘基磷酸化而使其失活。我們通過組織學(xué)檢查也發(fā)現(xiàn)一氧化碳可改善由 DSS損傷的結(jié)腸組織。在體外實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，CORM2可抑制LPS誘導(dǎo)的促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，以及GSK3β的信號(hào)傳導(dǎo)。
　　結(jié)論：通過研究一氧化碳的抗炎作用，我們發(fā)現(xiàn)一氧化碳可抑制GSK3β的活性及其信號(hào)傳導(dǎo)從而改善由 DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎。并且揭示了一氧化碳對(duì)