缺氧腸上皮細胞自噬的變化及意義.pdf

1、目的:自噬是指由細胞粗面內質網(wǎng)或高爾基體等細胞器脫落的雙層膜包裹部分細胞質和受損的細胞器及蛋白質，而后與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內容物的過程，從而滿足細胞本身的代謝需要及細胞器的不斷更新。自噬在細胞生長發(fā)育過程中起著極其重要的作用，在機體缺血缺氧性損害中也扮演著至關重要的角色。嚴重創(chuàng)傷及燒傷后易導致低血容量性休克，引起機體有效血容量減少導致全身組織缺血缺氧，機體為保證心腦血管等重要臟器血流供應，發(fā)生血液重分布，即指皮膚、

2、骨骼肌及腹腔內臟的血管收縮，而心、腦血管不收縮，從而保證心腦重要臟器血液供應。在血液重分布情況下腸道是最常受累的器官，因腸道組織灌流不足、氧需求增加及高代謝所造成的缺氧，導致腸黏膜結構與功能受損。目前缺血缺氧所致胃腸道上皮細胞的自噬情況尚不清楚，本研究利用體外缺氧模型模擬胃腸道缺血缺氧，動態(tài)觀察人腸上皮細胞Caco-2在缺氧條件下的自噬變化情況，旨在了解缺氧對腸上皮細胞自噬的影響，為研究自噬在缺氧后腸上皮細胞損害中作用奠定一定的基礎。<

3、br>　　方法:
　　1.以正常培養(yǎng)的人腸上皮細胞株Caco-2為研究對象，分別于常氧處理組（正常對照組）及缺氧組（0.5h、1h、2h、6h、12h及24h）提取細胞總蛋白并測其蛋白濃度。
　　2.采用蛋白免疫印法跡檢測自噬相關蛋白Beclin1、LC3及P62表達的變化，以反映缺氧后各時相點自噬相關分子水平的動態(tài)變化。
　　3.于細胞缺氧前及缺氧后6h用透射電子顯微鏡下觀察細胞自噬溶酶體的變化情況。
　　4.

4、GFP-LC3B融合蛋白示蹤腸上皮細胞，于缺氧前及缺氧后6h用激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞內自噬體形成的情況。
　　結果:
　　1.與常氧處理組比較，缺氧0.5h后腸上皮細胞Beclin1和LC3的蛋白表達水平即開始增加，隨后呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，于缺氧12h后達到高峰，24h后有所降低，但仍顯著高于正常;P62蛋白表達在缺氧后則逐漸降低，于缺氧24h將至最低。
　　2.透射電鏡觀察缺氧前后腸上皮細胞自噬變化的結果表明，缺氧

5、后6h時腸上皮細胞內自噬溶酶體增多，且明顯多于缺氧前水平，表明腸上皮細胞自噬水平增加。
　　3.GFP-LC3B融合蛋白示蹤腸上皮細胞顯示，缺氧6h后細胞內綠色熒光斑點顯著增加，表明自噬體形成也明顯增加。
　　結論:
　　1.缺氧后腸上皮細胞自噬水平較正常對照組明顯升高，并且自噬水平在一定范圍內隨著缺氧時間的延長而逐漸增強。
　　2.缺氧腸上皮細胞自噬相關蛋白Beclin1和LC3的蛋白表達水平顯著增加，而另一種