Notch1對NSCLC EMT獲得性EGFR-TKIs耐藥的調(diào)控作用.pdf

1、目的：探討Notch1對非小細(xì)胞肺癌發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)獲得性酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)抵抗作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用免疫組化(IHC)檢測組織標(biāo)本中肺癌中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)蛋白。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)分為6組：Control、Mock、N1CD、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib、N1ICD-shRNA組，N1ICD慢病毒過表達(dá)載體(LV-N1ICD)感染PC9上調(diào)Notch-1信號

2、通路，NICD-shRNA慢病毒干擾載體(LV-N1ICD-shRNA)感染PC9下調(diào)Notch-1信號通路，Mock是慢病毒空載體，72h后CCK-8檢測細(xì)胞活力，應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測細(xì)胞增殖及遷移能力，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期及凋亡，Western–blotting檢E-cadhenrin、Vimentin、Notch-1、Slug蛋白的表達(dá)變化。根據(jù)Western–blotting檢測結(jié)果應(yīng)用免疫組化(IHC)檢測臨床非小細(xì)胞肺癌(

3、NSCLC)組織及癌旁組織中的Slug蛋白的表達(dá)差異。
　　結(jié)果:IHC檢測NSCLC標(biāo)本肺癌組織及癌旁組織E-cadhenrin、Vimentin、Notch1蛋白的表達(dá)差異結(jié)果示：在NSCLC中Notch1、Vimentin蛋白表達(dá)上調(diào)，E-cadherin下調(diào)；而癌旁組織中Notch1、Vimentin蛋白表達(dá)下調(diào)，E-cadherin上調(diào)。在細(xì)胞試驗(yàn)中，CCK-8檢測細(xì)胞活力結(jié)果示：PC9在N1ICD組中增殖活力明顯增強(qiáng)。

4、劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示：N1ICD組中PC9細(xì)胞劃痕遷移明顯。細(xì)胞自動分析和分選裝置檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果示：N1ICD組與Control、Mock、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib、N1ICD-shRNA組比較，PC9細(xì)胞凋亡比例顯著減少。Western-blotting檢測結(jié)果顯示：在N1ICD組中，E-cadherin蛋白表達(dá)量明顯減少，與Control、Mock、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib及N1IC

5、D-shRNA組比較有顯著性差異(P<0.05)；Vimentin、Notch1、Slug等蛋白表達(dá)量明顯增多，與Control、Mock、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib及N1ICD-shRNA組比較有顯著性差異(P<0.05)。IHC檢測NSCLC標(biāo)本肺癌組織及癌旁組織Slug蛋白的表達(dá)差異結(jié)果示肺癌組織中Slug蛋白表達(dá)量增加。
　　結(jié)論：過表達(dá)Notch1信號會使得非小細(xì)胞肺癌EGFR-TKIs抵抗性增加