EGFr-TKIs治療晚期非小細(xì)胞肺癌獲得性耐藥應(yīng)對(duì)方法的探索研究.pdf

1、背景與目的：
　　非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的發(fā)病率和死亡率位居世界首位，多數(shù)病人確診時(shí)已處于晚期，預(yù)后差，療效差，表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)治療晚期非小細(xì)胞肺癌療效顯著提高，且安全性好，但最終仍會(huì)耐藥導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。EGFR-TKIs耐藥機(jī)制復(fù)雜，應(yīng)對(duì)困難，這也是目前研究的熱點(diǎn)，本研究旨在探索應(yīng)對(duì)EGFR-TKIs治療晚期NSCLC獲得性耐藥的方法。

2、
　　1.研究水飛薊賓對(duì)肺癌細(xì)胞A549/H1650增殖、遷移的影響及與吉非替尼聯(lián)合應(yīng)用的協(xié)同作用，觀察水飛薊賓對(duì)A549/H1650的上皮間質(zhì)化(EMT)主要調(diào)控蛋白的作用，觀察其逆轉(zhuǎn)上皮間質(zhì)化增強(qiáng)吉非替尼敏感性抗耐藥的作用。
　　2.研究EGFR-TKIs治療晚期NSCLC長(zhǎng)期獲益后獲得性耐藥的患者，化療后再次應(yīng)用EGFR-TKIs的療效。
　　3.研究厄洛替尼或吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌獲得性耐藥后阿法替尼治療

3、效果。
　　4.探索晚期NSCLC使用?？颂婺岖@得性耐藥后加大劑量繼續(xù)治療的療效。
　　方法：
　　1.用MTT法檢測(cè)水飛薊賓、吉非替尼及兩藥聯(lián)用對(duì)A549、H1650細(xì)胞增殖的影響;用劃痕愈合試驗(yàn)和Transwell遷移小室試驗(yàn)檢測(cè)水飛薊賓、吉非替尼及兩藥聯(lián)用對(duì)肺癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移能力的影響。用Western Blotting試驗(yàn)檢測(cè)水飛薊賓、吉非替尼及兩藥聯(lián)用對(duì)A549/H1650細(xì)胞中EMT及PI3K/AKT蛋白水

4、平表達(dá)的影響。
　　2.前瞻性對(duì)EGFR-TKIs治療晚期NSCLC長(zhǎng)期獲益后獲得性耐藥的患者，先化療，后再次應(yīng)用EGFR-TKIs治療，依據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)療效，比較再使用同一種EGFR-TKI與另一種EGFR-TKI的療效。
　　3.厄洛替尼或吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌獲得性耐藥后的患者，給予阿法替尼50mg，每日口服至疾病進(jìn)展或毒副反應(yīng)不能耐受，每6周1次CT掃描作療效評(píng)價(jià)，每4周1次作健康相關(guān)的生活質(zhì)量評(píng)估。<

5、br>　　4.?？颂婺嶂委煹耐砥诜切〖?xì)胞肺癌獲得性耐藥后，根據(jù)病情發(fā)展快慢，采用逐片加量和逐倍加量的形式進(jìn)行治療，增大的SD或腫瘤無(wú)變化但腫瘤標(biāo)志物持續(xù)升高的患者采用逐片加量的形式，PD患者采用逐倍加量的形式，按RECIST1.1標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，按照NCI-CTC3.0標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估不良反應(yīng)。
　　結(jié)果：
　　1.濃度為1μmol/L的吉非替尼和100μmol/L濃度的水飛薊賓對(duì)A549有一定的抑制作用，40μmol/L濃度的水

6、飛薊賓能抑制H1650的生長(zhǎng)，二者聯(lián)合作用比單藥作用明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，有明顯的濃度依賴性;在劃痕愈合試驗(yàn)中，水飛薊賓和吉非替尼降低了A549/H1650細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性，并呈劑量依賴性，兩藥聯(lián)用作用更強(qiáng)。Western blot顯示，水飛薊賓和吉非替尼單藥處理A549和H1650細(xì)胞后，EGFR的表達(dá)降低，PI3K/AKT的表達(dá)降低，E鈣黏蛋白的表達(dá)增加，N鈣黏蛋白和波形蛋白及下游EGFR信號(hào)通路下調(diào)，兩藥聯(lián)用作用更明顯，抑制上皮間

7、質(zhì)化從而對(duì)抗EGFR-TKI耐藥。
　　2.初次使用EGFR-TKIs的中位無(wú)進(jìn)展生存期為19個(gè)月，兩次應(yīng)用EGFR-TKI的間隔時(shí)間在4--15個(gè)月，13例再用同一種EGFR-TKI（同藥組），14例再用另一種EGFR-TKI（換藥組），總療效:完全緩解(CR)為1例(3.7％)，部分緩解(PR)為8例(29.6％)，穩(wěn)定(SD)為14例(51.9％)，進(jìn)展(PD)為4例(14.8％)，有效率RR為33.3％，疾病控制率(DCR

8、)為85.2％(95％ CI為62-94％)，再使用EGFR-TKI的mPFS為6個(gè)月，同藥組CR為1例(7.6％)，PR為2例(15.4％)，SD為8例(61.5％)，RR為23％，PD為2例(15.4％)，DCR為86.4％，mPFS為5個(gè)月，換藥組CR為0例，PR為6例(42.8％)，SD為6例(42.8％)，進(jìn)展為2例(14.3％)，RR為42.8％, mPFS為9.5個(gè)月，DCR為85.7％，兩組DCR用精確概率法計(jì)算P＞0.

9、05，無(wú)顯著性差異，兩組的PFS P＜0.05，有顯著性差異(Logrank檢驗(yàn));再使用的PFS換藥組明顯長(zhǎng)于同藥組。
　　3.吉非替尼或厄洛替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌患者獲得性耐藥后，26例使用阿法替尼治療，4例確認(rèn)為PR，總的反應(yīng)率(ORR)為15.3％(95％ CI，4％ to35％)，18例(69.23％)穩(wěn)定，9例(50％)疾病穩(wěn)定超過(guò)7個(gè)月，疾病控制率為84.6％(22/26)，中位無(wú)進(jìn)展生存期(mPFS)為5.85個(gè)

10、月(95％ CI，3 to13.7月)，中位總生存期(mOS)為17.9 months(95％CI8.6，NA)，治療耐受性良好。
　　4.常規(guī)劑量的?？颂婺嶂委熗砥诜切〖?xì)胞肺癌獲得性耐藥的25例患者，加倍劑量16例，逐片加量8例，脈沖式加量1例，2例無(wú)法評(píng)價(jià)療效，23例可評(píng)價(jià)病例均有效，8例(34.5％)(PR(2例為逐片加量)，13例(56.5％) SD，癥狀緩解，腫瘤標(biāo)志物下降或穩(wěn)定，疾病控制率DCR91.3％，2例(8.7

11、％)PD，7例患者后因經(jīng)濟(jì)困難恢復(fù)常規(guī)劑量而病情進(jìn)展，中位PFS4.5個(gè)月，不良反應(yīng)沒(méi)有增加。
　　結(jié)論：
　　1.水飛薊賓對(duì)肺癌細(xì)胞A549/H1650有一定的抑制作用，而且對(duì)吉非替尼有增敏作用，抑制肺癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)化，這為水飛薊賓聯(lián)合吉非替尼治療晚期非小細(xì)胞肺癌、逆轉(zhuǎn)EGFR-TKI獲得性耐藥提供了理論依據(jù)。
　　2.EGFR-TKIs治療晚期NSCLC長(zhǎng)期獲益后獲得性耐藥的患者，先化療、后再次應(yīng)用EGFR-TK