EGFR--TKIs抑制溶酶體功能導(dǎo)致SQSTM1積聚在非小細(xì)胞肺癌EGFR--TKIs耐藥中的作用和機(jī)制.pdf

1、背景:
　　表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)，在晚期非小細(xì)胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC)的治療中占據(jù)了十分重要的地位。然而，原發(fā)以及快速發(fā)生的獲得性耐藥導(dǎo)致EGFR-TKIs在NSCLC的治療中遭遇了諸多困境。因此，尋找能夠有效增敏EGFR-TKIs或逆轉(zhuǎn)NSCLC耐受EGFR-TKIs的方法具有重要的臨床意義。而作為介導(dǎo)細(xì)胞自噬、能量感應(yīng)、氧化應(yīng)激等多個(gè)信號通路的

2、關(guān)鍵配體蛋白SQSTM1在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及耐藥中均發(fā)揮了非常重要的作用，但SQSTM1是否也參與調(diào)控肺癌細(xì)胞耐受EGFR-TKIs的過程尚未見報(bào)道。
　　目的:
　　探討EGFR-TKIs是否引起SQSTMI的表達(dá)變化及其可能機(jī)制，揭示SQSTM1在NSCLC EGFR-TKIs耐藥中的作用，為臨床上逆轉(zhuǎn)NSCLC等惡性腫瘤的EGFR-TKIs耐藥提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　利用western blot研究E

3、GFR-TKIs(Gefitinib、Erlotinib和AZD9291)對SQSTM1的表達(dá)調(diào)控作用、敲減SQSTM1聯(lián)合EGFR-TKIs引起的凋亡蛋白的表達(dá)變化、EGFR-TKIs對自噬相關(guān)蛋白的調(diào)控作用;運(yùn)用MTS實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證敲減SQSTM1對EGFR-TKIs的增敏作用、過表達(dá)SQSTMI引起的EGFR-TKIs抵抗;通過流式細(xì)胞術(shù)分析敲減SQSTMI聯(lián)合EGFR-TKIs對肺癌細(xì)胞凋亡的影響;通過轉(zhuǎn)染siRNA或質(zhì)粒的方法研究敲

4、減或過表達(dá)SQSTM1對EGFR-TKIs殺傷NSCLC敏感性的影響;利用定量PCR檢測EGFR-TKIs處理非小細(xì)胞肺癌后對SQSTM1mRNA水平的影響;利用免疫熒光技術(shù)檢測EGFR-TKIs對自噬狀態(tài)以及溶酶體功能的影響。
　　結(jié)果:
　　EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)以濃度梯度和時(shí)間梯度依賴的方式上調(diào)SQSTM1的蛋白水平，敲減SQSTMI可以通過誘導(dǎo)凋亡而明顯增敏EGFR-TKIs對NSC

5、LC的殺傷效果，而過表達(dá)SQSTM1則會提高NSCLC對EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)的耐受。我們研究發(fā)現(xiàn)，EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)對SQSTMI的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有明顯影響，而是通過阻斷細(xì)胞自噬來抑制其蛋白降解而上調(diào)其水平。我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，EGFR-TKISs(Gefitinib和AZD9291)并未阻斷自噬體的形成及自噬體與溶酶體的融合，而是通過抑制溶酶體的功能來抑制細(xì)胞自噬。