Metformin抑制IL‐6-STAT3信號(hào)途徑克服肺癌EGFR‐TKI獲得性耐藥的作用和機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景:
　　吉非替尼(Iressa)和厄洛替尼(Tarceva)是可逆的小分子表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI),該類藥物對(duì)于有EGFR突變的非小細(xì)胞肺癌患者具有非常好的治療效果,現(xiàn)已作為具有EGFR突變的非小細(xì)胞肺癌患者的一線治療藥物。然而,大多數(shù)接受EGFR-TKI治療初始有效的非小細(xì)胞肺癌患者在開始使用EGFR-TKI后10個(gè)月內(nèi)將對(duì) EGFR-TKI藥物發(fā)生耐藥,此后患者的病情將進(jìn)一步惡化。因此EGF

2、R-TKI獲得性耐藥成為限制 EGFR-TKI廣泛應(yīng)用的瓶頸,而研究一種能夠逆轉(zhuǎn)EGFR-TKI獲得性耐藥的策略在肺癌的治療方面顯得尤為重要。
　　對(duì)于EGFR-TKI耐藥機(jī)制的研究很多,近年來的研究發(fā)現(xiàn)有多種不同的分子機(jī)制參與其中,主要包括EGFR二次突變(EGFR T790M)、MET基因擴(kuò)增以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)等機(jī)制。研究表明EMT的發(fā)生對(duì)于EGFR-TKI耐藥的產(chǎn)生有非常大的相關(guān)性,現(xiàn)已證實(shí)TGF-β是EMT的主要驅(qū)

3、動(dòng)因子,并且TGF-β可以激活I(lǐng)L-6信號(hào)通路,進(jìn)而促進(jìn)EMT以及誘導(dǎo)EGFR-TKI耐藥。與此同時(shí)有研究證實(shí)當(dāng)IL-6/STAT3信號(hào)通路被抑制時(shí),EGFR-TKI耐藥程度減弱。因此我們認(rèn)為抑制IL-6/STAT3信號(hào)通路的激活以及逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程將有可能成為克服EGFR-TKI耐藥。
　　二甲雙胍(Metformin)作為一種被廣泛應(yīng)用的治療糖尿病藥物,如今逐漸被發(fā)現(xiàn)在腫瘤治療領(lǐng)域具有巨大的潛力。相關(guān)臨床實(shí)驗(yàn)表明服用二甲雙胍可以

4、降低罹患腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)以及腫瘤的死亡率,而小鼠腫瘤模型體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)二甲雙胍展示出了相當(dāng)強(qiáng)的抑制腫瘤生長的效應(yīng),當(dāng)二甲雙胍與化療藥物(紫杉醇、順鉑)聯(lián)合在裸鼠移植瘤模型中使用時(shí),能夠有效的抑制移植瘤的生長以及延長裸鼠移植瘤模型的生存期。此外,二甲雙胍可以阻斷TGF-β誘導(dǎo)的EMT過程,降低IL-6分泌以及抑制STAT3活性。因此我們有理由認(rèn)為二甲雙胍可能通過抑制 IL-6/STAT3信號(hào)通路的激活以及逆轉(zhuǎn) EMT進(jìn)程進(jìn)而克服EGFR-TKI耐

5、藥。
　　目的:
　　表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)對(duì)于 EGFR突變陽性的非小細(xì)胞肺癌患者具有非常好的療效,然而EGFR-TKI獲得性耐藥成為嚴(yán)重影響其臨床療效以及廣泛應(yīng)用的瓶頸。現(xiàn)有研究表明抑制IL-6/STAT3信號(hào)通路的激活以及逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程可以克服 EGFR-TKI耐藥。本研究旨在研究二甲雙胍是否能夠通過抑制IL-6/STAT3信號(hào)通路的激活以及逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程克服肺癌EGFR-TKI耐藥。

6、r>　　方法:
　　本研究主要通過 BrdU、MTT、流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)、免疫熒光、免疫組化、侵襲實(shí)驗(yàn)、Western blot、構(gòu)建裸鼠移植瘤等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)二甲雙胍通過抑制 IL-6/STAT3信號(hào)通路的激活以及逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程在體外和體內(nèi)克服肺癌細(xì)胞發(fā)生EGFR-TKI耐藥。
　　結(jié)果:
　　1.本研究證實(shí)了被廣泛應(yīng)用的糖尿病藥物二甲雙胍在體外可以有效的抑制IL-6/STAT3信號(hào)通路的激活以及逆轉(zhuǎn)EMT進(jìn)程,并且提高

7、EGFR-TKI耐藥肺癌細(xì)胞對(duì)EGFR-TKI的敏感性。
　　2.外源性直接給予 IL-6或者構(gòu)建內(nèi)源性高表達(dá) IL-6細(xì)胞模型均可以誘導(dǎo)EGFR-TKI敏感細(xì)胞株發(fā)生EGFR-TKI耐藥。當(dāng)輔以二甲雙胍聯(lián)合IL-6處理時(shí),發(fā)生EGFR-TKI耐藥的敏感細(xì)胞株恢復(fù)對(duì)EGFR-TKI的敏感性。
　　3.裸鼠移植瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)二甲雙胍聯(lián)合 EGFR-TKI喂食裸鼠可有效抑制了裸鼠移植瘤的生長。并且有效降低了裸鼠體內(nèi)IL-6的