miR-137在小細(xì)胞肺癌獲得性多藥耐藥中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一,且仍處于逐年上升的趨勢(shì)。在各種類(lèi)型的肺癌中,小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)占15％-20%。SCLC癌細(xì)胞倍增時(shí)間短,進(jìn)展快,常伴內(nèi)分泌異常或類(lèi)癌綜合癥。雖然SCLC患者對(duì)首次化療非常敏感,有效率高達(dá)80%,但是90%以上的患者會(huì)復(fù)發(fā),其中位生存期僅6-8個(gè)月,五年生存率僅3%-8%,并且這一現(xiàn)狀并沒(méi)有隨著新的化療藥物的出現(xiàn)和化療方案的改進(jìn)而得到改善。SCLC患者

2、復(fù)發(fā)后表現(xiàn)出的獲得性多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR)是化療失敗的最主要原因之一,也是長(zhǎng)期困擾臨床SCLC化療的難題。
　　SCLC獲得性MDR機(jī)制比較復(fù)雜,大致分為內(nèi)源性耐藥和獲得性耐藥,由多種基因參與和多種機(jī)制共同作用導(dǎo)致產(chǎn)生。微小RNA(micro RNA,miRNA)作為生物體內(nèi)重要的基因調(diào)控因子,是目前生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。miRNAs不僅參與生物體正常的生理過(guò)程,在疾病發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮

3、著一定的作用。研究證實(shí),miRNAs在肺癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲以及獲得性MDR中均起著一定的調(diào)控作用。
　　為了探討SCLC獲得性MDR機(jī)制,本研究對(duì)SCLC獲得性MDR細(xì)胞H446/CDDP及其親代H446細(xì)胞進(jìn)行miRNAs深度測(cè)序后發(fā)現(xiàn),miR-137在H446細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著性高于H446/CDDP細(xì)胞。通過(guò)對(duì)H446細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-137inhibitor后發(fā)現(xiàn),順鉑誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率顯著下降;而對(duì)H446/CDD

4、P細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-137mimics后發(fā)現(xiàn),順鉑誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞凋亡率卻顯著升高,與此同時(shí),miR-137的靶蛋白--KIT的表達(dá)水平顯著下調(diào)。本研究結(jié)果揭示,miR-137可望成為逆轉(zhuǎn)SCLC獲得性MDR的一個(gè)潛在作用靶點(diǎn)。
　　目的:
　　探討miR-137在SCLC獲得性MDR中的作用及分子機(jī)制,為耐藥逆轉(zhuǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.運(yùn)用miRNAs深度測(cè)序聯(lián)合real-timePCR的方法,

5、篩選SCLC獲得性MDR相關(guān)miRNAs。
　　2.運(yùn)用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法,在干預(yù)H446和H446/CDDP細(xì)胞中miR-137表達(dá)的基礎(chǔ)上,通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及藥物敏感性等,探討miR-137在SCLC獲得性MDR中的作用機(jī)制。
　　3.運(yùn)用Targetscan、miRanda及miRDB等軟件預(yù)測(cè)受miR-137調(diào)控的潛在下游靶基因。
　　4.采用蛋白印記(Western-blot)技術(shù)檢測(cè)miR-137下游

6、調(diào)控靶基因KIT的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.miRNAs深度測(cè)序發(fā)現(xiàn),相對(duì)親代H446細(xì)胞,miR-137在H446/CDDP中的表達(dá)水平顯著性降低(P<0.01)。Real-timePCR結(jié)果進(jìn)一步證實(shí),miR-137在H446/CDDP中表達(dá)水平顯著性低于H446細(xì)胞(P<0.01)。
　　2.miR-137mimics轉(zhuǎn)染H446/CDDP細(xì)胞后可顯著上調(diào)H446/CDDP細(xì)胞中miR-137表達(dá)水平,并顯

7、著增加順鉑誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率(P<0.01)。
　　3.miR-137inhibitor轉(zhuǎn)染H446細(xì)胞后可顯著下調(diào)H446細(xì)胞中的miR-137表達(dá)水平,并顯著降低順鉑誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率(P<0.01)。
　　4.Western-blot結(jié)果顯示,miR-137mimics可顯著性下調(diào)H446/CDDP細(xì)胞表達(dá)KIT蛋白水平(P<0.05)。
　　結(jié)論:MiR-137通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡參與SCLC獲得性M