利用Cre-loxP系統(tǒng)的一個(gè)marker-free植物表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)可將具有優(yōu)良性狀的目的基因?qū)胧荏w植物基因組中，從而使得許多植物的遺傳性狀得到改良。隨著植物生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因技術(shù)以其巨大的應(yīng)用價(jià)值，正逐步成為非常重要的育種手段。但是由于在轉(zhuǎn)化過(guò)程中往往只有少數(shù)植物細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，吸收并將外源DNA整合到受體植物基因組中，由于大多數(shù)細(xì)胞并未發(fā)生轉(zhuǎn)化，因此非常有必要用標(biāo)記基因來(lái)篩選含。目的基因的轉(zhuǎn)化體。這些轉(zhuǎn)化后的受體植物因有特定的選擇性標(biāo)記，可以方便的得以識(shí)別和鑒定。然而一但獲得轉(zhuǎn)化植物，

2、標(biāo)記基因就變得不再有用，但卻長(zhǎng)期存在于植物體內(nèi)并發(fā)生表達(dá)。由于人們?cè)灰骊P(guān)心轉(zhuǎn)基因植物中標(biāo)記基因的安全性問(wèn)題，這些問(wèn)題包括：(1)對(duì)植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化帶來(lái)的負(fù)面影響；(2)許多選擇標(biāo)記基因尚不確定是否會(huì)對(duì)環(huán)境中其它植物產(chǎn)生影響及對(duì)人類產(chǎn)生毒性和過(guò)敏；(3)重復(fù)多個(gè)基因轉(zhuǎn)化以增加優(yōu)良性狀轉(zhuǎn)基因數(shù)目時(shí)若使用相同的標(biāo)記基因?qū)⑹掷щy。為了解決這些問(wèn)題，近年來(lái)已有報(bào)道通過(guò)許多方法來(lái)獲得無(wú)標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因植物。這種無(wú)標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因技術(shù)最終將去除轉(zhuǎn)化體

3、中的標(biāo)記基因序列。因此無(wú)標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)化技術(shù)已越來(lái)越多的受到人們的關(guān)注。由于具有時(shí)間、組織和位點(diǎn)特異性，Cre重組酶介導(dǎo)的DNA重組已成為獲得無(wú)標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植物的一個(gè)重要工具。Cre/loxP位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)來(lái)源于噬菌體P1，由兩部分組成：重組酶Cre和它的識(shí)別位點(diǎn)loxP。Cre重組酶介導(dǎo)重組事件導(dǎo)致兩個(gè)相鄰的同向loxP位點(diǎn)之間的DNA片段被刪除。 本實(shí)驗(yàn)利用植物表達(dá)載體pRAL-MCS構(gòu)建一個(gè)新型實(shí)用的可選擇性去除標(biāo)記基因的