糖尿病大鼠角膜超微結(jié)構(gòu)的變化及角膜上皮損傷修復(fù)過程中緊密連接蛋白occludin重塑的特點.pdf

1、目的：探討糖尿病大鼠和正常大鼠角膜超微結(jié)構(gòu)的變化及角膜上皮修復(fù)過程中緊密連接蛋白occludin重塑的特點。
　　方法：100只SD大鼠隨機分為糖尿病組和正常組各50只（糖尿病組均高脂喂養(yǎng)），通過腹腔注射STZ誘導(dǎo)形成Ⅱ型糖尿病大鼠模型，于造模成功3個月后，將糖尿病大鼠和正常大鼠先用4mm的中央角膜環(huán)鉆標(biāo)記，然后用鈍的眼科手術(shù)刀片去除標(biāo)記內(nèi)的角膜上皮，形成創(chuàng)傷。于損傷后0h（未損傷）、16h、48h、72h、120h（每組每個時間

2、點各5只）處死大鼠取角膜。觀察糖尿病大鼠和正常大鼠角膜上皮的超微結(jié)構(gòu)；間接免疫熒光和Western blot分析occludin蛋白在損傷修復(fù)過程中的變化。
　　結(jié)果：1.正常大鼠與糖尿病大鼠體重的比較,在高脂喂養(yǎng)4周后（注射STZ之前）正常對照組大鼠平均體重（370g）較糖尿病大鼠（400g）低7.5％（P<0.01），但在第16周時糖尿病大鼠的平均體重（410g）較正常對照組大鼠（510g）低19.6%（P<0.01）。在高脂

3、喂養(yǎng)4周后（注射STZ之前）正常對照組空腹血糖值約為4mmol/l，糖尿病組約為6mmol/l，但在第16周時糖尿病大鼠的空腹血糖值約為20mmol/l（P<0.05），正常對照組的血糖值仍為5mmol/l（P<0.01）。2.角膜上皮創(chuàng)傷修復(fù)觀察,正常對照組在術(shù)后16h和24h的損傷愈合率達55%和84%，（P<0.01）而糖尿病組在術(shù)后16h和24h的損傷愈合率為34%和56%（P<0.01）。糖尿病大鼠的角膜損傷愈合率較正常對照組

4、大鼠有明顯的延遲3.電鏡下觀察糖尿病大鼠角膜上皮可見大量片狀剝脫，上皮細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞連接松弛；上皮表面微絨毛數(shù)量減少，可見水腫和斷裂脫落。正常大鼠角膜上皮平坦，細(xì)胞間連接緊密；角膜上皮表面微絨毛排列和密度良好，無水腫和斷裂現(xiàn)象。4.HE染色觀察大鼠在角膜上皮去除術(shù)前正常對照組大鼠的角膜上皮為多層上皮細(xì)胞，在上皮去除術(shù)后16h和48h，可以觀察到單層或多層角膜上皮細(xì)胞覆蓋在缺損表面的邊緣，72h時角膜上皮的重建已經(jīng)完成。糖尿病大鼠在角

5、膜上皮去除術(shù)前其角膜上皮基底細(xì)胞和基質(zhì)層水腫，上皮去除術(shù)后16h時缺損表面仍沒有被覆蓋，在上皮去除術(shù)后48h和72h時可以觀察到較正常對照組只有少量的角膜上皮細(xì)胞覆蓋在上皮的缺損處。5.免疫熒光檢測角膜上皮發(fā)現(xiàn)，occludin蛋白分布在表層角膜上皮細(xì)胞的邊緣。角膜上皮未去除時糖尿病組和正常組之間未觀察到有明顯的差別。角膜上皮去除16h后，可以觀察到糖尿病組角膜上皮 occludin表達較正常組明顯更弱，且排列不規(guī)則。角膜上皮去除48h

6、后，可以觀察到糖尿病角膜上皮occludin的表達較糖尿病組16h時明顯增強，排列也更規(guī)則，但仍比48h時正常組 occludin的表達低。角膜上皮去除后72h，兩組 occludin的表達都更規(guī)則與未損傷時無明顯差別。在角膜上皮去除120h后，兩組間未觀察到明顯區(qū)別。6.通過Western blot觀察occludin蛋白的表達。觀察未損傷大鼠的角膜上皮 occludin的表達發(fā)現(xiàn)正常對照組和糖尿病組之間的表達量無明顯的差別(P>0.