上皮鈣粘蛋白和緊密連接蛋白-3在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、卵巢癌是最常見(jiàn)的婦科腫瘤之一。該腫瘤發(fā)病十分隱匿，早期很難察覺(jué)，發(fā)現(xiàn)時(shí)一般都處于臨床晚期；此時(shí)，多數(shù)腫瘤都己發(fā)生不同程度的轉(zhuǎn)移，手術(shù)難以根除，且術(shù)后常有復(fù)發(fā)。因此，卵巢癌被認(rèn)為是預(yù)后最差的婦科惡性腫瘤之一。深入研究原發(fā)性卵巢癌的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)機(jī)制，并積極探索有效的治療措施成為當(dāng)前原發(fā)性卵巢癌診治中迫切需要解決的重點(diǎn)問(wèn)題。
　　 上皮細(xì)胞鈣粘蛋白(E-cadherin)是Cadherin家族中的主要成員，在極化上皮細(xì)胞之間的粘附中起了

2、主要作用。不同的組織器官中E-cadherin的表達(dá)具有一定的特異性。有研究表明，作為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制分子，E-cadherin的表達(dá)減少不僅與腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移形成有關(guān)，而且通過(guò)激活WNT/β-連環(huán)蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)促進(jìn)特定癌基因如c-myc，cyclinD1之類的過(guò)表達(dá)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。目前對(duì)E-cadherin的認(rèn)識(shí)仍然處于起步階段，其結(jié)構(gòu)、功能的特異性及與細(xì)胞內(nèi)、外其它物質(zhì)之間的相互作用關(guān)系、調(diào)節(jié)機(jī)制等仍未完全明了，E-cadherin

3、在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中所起的具體作用仍不清楚，確切的發(fā)病機(jī)制也有待進(jìn)一步探討。
　　 Claudins是構(gòu)成緊密連接的骨架蛋白，可以維持緊密連接所特有的柵欄和屏障功能。腫瘤通常會(huì)伴隨著緊密連接破壞而發(fā)生，從而使腫瘤細(xì)胞間黏附作用減弱以及侵襲力增強(qiáng)。Claudin-3是緊密連接的主要跨膜蛋白，該蛋白在細(xì)胞間傳輸轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要的接頭作用，是細(xì)胞黏附功能的基礎(chǔ)。研究表明Claudin-3在眾多腫瘤組織中異常表達(dá)，提示Claudin-

4、3的異常表達(dá)很可能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。然而目前Claudin-3在卵巢腫瘤中的表達(dá)及作用尚不完全清楚，有待進(jìn)一步研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化和熒光定量PCR檢測(cè)E-cadherin和Claudin-3在上皮性卵巢癌中的蛋白表達(dá)和mRNA水平情況，及其在卵巢癌中的表達(dá)與患者的年齡、病理類型、FIGO分期、組織分化、有無(wú)腹膜轉(zhuǎn)移等臨床病理特征之間的關(guān)系；以及E-cadherin和Claudin-3在卵巢癌中的表達(dá)與患者5年

5、生存率之間的關(guān)系，從而進(jìn)一步了解E-cadherin和Claudin-3的表達(dá)與上皮性卵巢癌的侵襲、轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，以期為臨床上皮性卵巢癌的診斷治療，及預(yù)后評(píng)估提供理論依據(jù)。
　　 研究方法：
　　 1、采用免疫組化S-P法檢測(cè)7例良性卵巢腫瘤、13例交界性卵巢腫瘤和64例上皮性卵巢癌的石蠟包埋標(biāo)本及3例正常卵巢組織石蠟包埋標(biāo)本中E-cadherin和Claudin-3的表達(dá)情況。
　　 2、利用熒光定量PCR(

6、Real-time PCR)檢測(cè)E-cadherin和Claudin-3的mRNA在人類正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤及卵巢癌中的表達(dá)情況。
　　 3、采集患者完整的臨床信息(包括卵巢癌患者的FIGO分期、病理類型、癌組織分化程度、腹膜轉(zhuǎn)移的有無(wú)及手術(shù)方式、化療次數(shù)、是否存活等)及對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析：樣本率的比較用x2檢驗(yàn)，組間比較采用t檢驗(yàn)，E-cadherin和Claudin-3與病人生存期的關(guān)系用單因素分析及生存曲線。

7、r>　　 結(jié)果：
　　 1、E-cadherin和Claudin-3在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌中的表達(dá)(免疫組化)：
　　 (1)E-cadherin在正常卵巢組織無(wú)表達(dá)；7例良性卵巢腫瘤中E-cadherin陽(yáng)性染色6例，陽(yáng)性率為85.7％；13例交界性卵巢腫瘤中E-cadherin陽(yáng)性染色9例，陽(yáng)性率為69.2％；64例卵巢癌中E-cadherin陽(yáng)性染色35例，陽(yáng)性率為54.7％。卵巢癌中E-cadherin的

8、表達(dá)明顯低于良性組和交界性組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (2)claudin-3在正常卵巢組織無(wú)表達(dá)；7例良性卵巢腫瘤中claudin-3陽(yáng)性染色2例，陽(yáng)性率為28.6％；13例交界性卵巢腫瘤中claudin-3陽(yáng)性染色6例，陽(yáng)性率為46.2％；64例卵巢癌中claudin-3陽(yáng)性染色40例，陽(yáng)性率為62.5％。卵巢癌中claudin-3的表達(dá)明顯高于良性組和交界性組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

9、>　　 2、 E-cadherin和Claudin-3在正常卵巢、良性卵巢腫瘤及卵巢癌組織中mRNA的水平(RT-PCR)：
　　 (1)E-cadherin在良性卵巢腫瘤、卵巢癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期和Ⅳ期患者的卵巢組織內(nèi)mRNA的水平與正常卵巢組織的相比均表達(dá)下調(diào)，分別為正常組的0.95±0.05倍，0.92±0.07倍，0.74±0.01倍，0.53±0.02倍(P＜0.05)和0.35±0.05倍(P＜0.05)。說(shuō)明E-cad

10、herin mRNA的水平與卵巢癌期別有關(guān)，期別越晚，表達(dá)水平越低。
　　 (2)claudin-3在良性卵巢腫瘤、卵巢癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期和Ⅳ期患者的卵巢組織內(nèi)mRNA的水平與正常卵巢組織的相比均表達(dá)上調(diào)，分別為正常組的1.50±0.07倍，2.12±0.12倍(P＜0.05)，2.99±0.13倍(P＜0.05)，14.56±0.19倍(P＜0.01)和19.22±0.22倍(P＜0.01)。說(shuō)明卵巢腫瘤組織內(nèi)claudin-3m

11、RNA水平明顯高于正常卵巢組織。
　　 3、E-cadherin和Claudin-3的表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 (1)E-cadherin在低分化卵巢癌中的陽(yáng)性率為31.6％；在中分化卵巢癌中的陽(yáng)性率為51.7％；在高分化卵巢癌中的陽(yáng)性率為87.5％，E-cadherin隨著分化程度的增高而表達(dá)增加，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。claudin-3在低分化卵巢癌中的陽(yáng)性率為87.5％；在中分化卵巢

12、癌中的陽(yáng)性率為58.6％；在高分化卵巢癌中的陽(yáng)性率為47.4％，claudin-3隨著分化程度的增高而表達(dá)降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (2)E-cadherin在漿液性卵巢癌中的陽(yáng)性率為53.7％；在粘液性卵巢癌中的陽(yáng)性率為58.8％；在子宮內(nèi)膜樣癌中的陽(yáng)性率為50.0％，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。claudin-3在漿液性卵巢癌中的陽(yáng)性率為70.7％；在粘液性卵巢癌中的陽(yáng)性率為52.9％；在子宮內(nèi)膜樣癌中的陽(yáng)性率

13、為33.3％，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (3)E-cadherin在卵巢上皮性癌Ⅰ～Ⅱ期中的陽(yáng)性表達(dá)率90.0％，Ⅲ～Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率則為23.5％，隨著腫瘤的進(jìn)展而表達(dá)減少，分期間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。claudin-3在卵巢上皮性癌Ⅰ～Ⅱ期中的陽(yáng)性表達(dá)率35.3％，Ⅲ～Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率則為93.3％，隨著腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移表達(dá)增加，分期間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 總之，

14、E-cadherin和claudin-3在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)與患者年齡、血漿CA125的高低均無(wú)關(guān)(P＞0.05)，而與卵巢上皮性癌的FIGO分期、癌組織分化程度、病理類型、有無(wú)腹膜轉(zhuǎn)移均有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 4、E-cadherin和claudin-3的表達(dá)與患者生存期的關(guān)系
　　 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，E-cadherin在卵巢癌Ⅰ+Ⅱ期中陽(yáng)性表達(dá)的患者：5年的生存率是96.3％；而E-c

15、adherin陰性表達(dá)的患者，1年生存率71.4％，3年生存率57.1％，5年生存率是42.9％，可見(jiàn)在早期卵巢癌中，兩者對(duì)于患者的生存率有明顯差異(P＜0.05)。而E-cadherin在卵巢癌Ⅲ+Ⅳ期中陽(yáng)性表達(dá)的患者：1年的生存率是75.0％；3年生存率是62.5％；5年的生存率是50.0％；陰性表達(dá)的患者：1年的生存率是81.8％；2年生存率是45.5％；3年的生存率是31.8％；5年的生存率是18.2％；兩者之間差異顯著，有統(tǒng)計(jì)

16、學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 claudin-3在早期卵巢癌中的表達(dá)對(duì)于患者的生存率無(wú)明顯差異。但claudin-3在卵巢癌Ⅲ+Ⅳ期中陽(yáng)性表達(dá)的患者：1年的生存率是78.6％；3年的生存率是42.9％；5年生存率28.6％；而claudin-3陰性表達(dá)的患者5年的生存率是50.0％；兩者之間差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、E-cadherin在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與侵襲、轉(zhuǎn)移密