蟲生真菌-萊氏野村菌Nr1001菌株的生物學研究與應用.pdf

1、本文以從河南省農業(yè)科學院現代農業(yè)試驗與示范基地的花生田罹病甜菜夜蛾幼蟲蟲尸上分離獲得一株蟲生真菌菌株(編號為1001)為研究對象，從形態(tài)學及分子生物學方面對其進行準確鑒定，并對該菌株的生物學特性、大規(guī)模培養(yǎng)方法、室內及田間防治效果等方面進行了研究，主要結果如下：
　　 通過室外采集樣品，用組織分離法在PDA培養(yǎng)基上對所獲得的菌株進行分離篩選，獲得一株對鱗翅目夜蛾科幼蟲具有較高毒力的蟲生真菌菌株，編號為1001。
　　 將

2、該菌株在PDA和SMAY培養(yǎng)基上培養(yǎng)，并對其進行形態(tài)學觀察，結果表明，在PDA培養(yǎng)基上，菌落呈致密的短絨毛狀，初時白色，且生長緩慢，一個月內直徑才達0.6～1.8cm。在SMAY培養(yǎng)基上10天后的菌落直徑2.6cm，約5-7天后產孢，產孢后菌落為黃綠色或綠色，大約10-15天后，孢子會被新萌發(fā)的菌絲所覆蓋，無霉味和滲出物，背面無色或微黃。
　　 通過對該菌株進行顯微觀察，結果表明，其分生孢子呈橢圓形或圓筒形，一端稍尖，一端略鈍，

3、表面光滑，有些孢子之間有連接，淡綠色。分生孢子大小為(4.5～5.2)×(2.8～3.5)μm。營養(yǎng)菌絲光滑，分隔，透明或稍帶顏色，菌絲直徑2μm-3μm，無孢梗束。該菌株初步鑒定為萊氏野村菌。
　　 用分子生物學方法對該菌株的rDNA-ITS序列進行測序并在NCBI網站GenBank數據庫中進行序列比對，結果表明，該菌ITS序列長度為619bp，與NomuraearileyiMAFF830007同源性為99％；與另外兩個Nom

4、uraearileyi菌株的序列也只有3個堿基的差別，由此，進一步判定該菌株為萊氏野村菌(Nomuraearileyi)。
　　 將該菌株在含有不同C、N源、C/N及維生素和微量元素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，并通過DPS軟件進行分析，結果表明，適宜菌絲生長和產孢的的碳源分別為葡萄糖和棉子糖，氮源為酵母粉；當C/N比分別為15:1和30:1時，最適宜其菌絲生長和產孢，添加微量元素錳、鐵和維生素VB3、VB12等對萊氏野村菌的生長和產孢有

5、促進作用。
　　 將該菌株在不同的溫度、pH、濕度、光照、接種量及搖床轉速下進行固體和液體培養(yǎng)，并用DPS軟件進行分析，結果表明，在固體培養(yǎng)條件下，最適宜生長和產孢的溫度、pH和光照和濕度分別為30℃和25℃、pH=7、8L/16D和95％。在液體培養(yǎng)條件下，當pH為6時最適宜其生長，當接種量和搖床轉速分別為1ml和180rpm時，菌絲干重達到最大值。
　　 通過四因素五水平的正交試驗，用SPSS軟件進行分析，篩選出了最

6、利于其產孢的固體培養(yǎng)基配方為麥芽糖20g/L、酵母5g/L、Mn1.5mg/L、VB120.1mg/L。
　　 用液固雙相法大量培養(yǎng)萊氏野村菌分生孢子，結果表明：以60g大豆為基質加入6％麥芽糖的組合為大量培養(yǎng)萊氏野村菌分生孢子最優(yōu)配方。
　　 以濃度分別為1.14×109孢子·mL-1、1.14×108孢子·mL-1、1.14×107孢子·mL-1、1.14×106孢子·mL-1、1.14×105孢子·mL-1的Nr1

7、001孢懸液對棉鈴蟲三齡幼蟲進行室內毒力試驗，經過SPSS軟件分析，死亡率分別為70.53％、46.4％、34.4％、22.19％、19.12％，接種后第13天的致死中濃度為LC50=1.163×108個孢子·mL-1，毒力回歸方程式為：Y=0.383X-3.088。
　　 用9種不同藥劑進行田間試驗并用DPS軟件進行分析，結果表明，萊氏野村菌Nr1001菌株對大豆田夜蛾科幼蟲具有較好的防治效果，施藥后3天、7天、14天蟲口減退