安徽蟲生真菌資源及RCEF6202菌株抗菌活性研究.pdf

1、蟲草及其相關(guān)真菌的資源調(diào)查是一項非常重要的任務(wù)。2012和2013年間，對安徽省岳西縣鷂落坪自然保護(hù)區(qū)和祁門縣牯牛降自然保護(hù)區(qū)進(jìn)行了多次蟲草標(biāo)本的采集。發(fā)現(xiàn)新種豐富安徽省乃至我國蟲生真菌資源庫或者探究蟲草生物學(xué)特性、解決困擾學(xué)術(shù)界難題是本研究的理論目的；發(fā)現(xiàn)可用于醫(yī)藥的蟲生真菌并加以開發(fā)利用則具有意義重大的經(jīng)濟(jì)價值和社會價值。
　　目前泛義的蟲草屬Cordyceps s. l.真菌被劃分入Cordyceps s. s.、Metac

2、ordyceps、Ophiocordyceps、Tyrannicordyceps、Polycephalomyces和Tolypocladium等屬中。采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)與ITS區(qū)段分子生物學(xué)相結(jié)合的手段，參照原始文獻(xiàn)以及MycoBank和GenBank權(quán)威數(shù)據(jù)庫對蟲草及其相關(guān)真菌進(jìn)行正確鑒定，并使用最新的分類系統(tǒng)、踐行新的命名法規(guī)中第59條新規(guī)定的“一個真菌一個名稱”對其歸類與命名。另外，Tolypocladium屬的很多真菌能代謝產(chǎn)生具

3、有免疫抑制作用的環(huán)孢菌素，采用牛津杯法對T. cicadae發(fā)酵液、菌絲體和子實體的乙酸乙酯提取物進(jìn)行抑菌活性試驗。主要研究結(jié)果與結(jié)論如下：
　　下垂線蟲草Ophiocordyceps nutans為岳西縣鷂落坪自然保護(hù)區(qū)優(yōu)勢種群，其次為蛹蟲草 Cordyceps militaris。該地區(qū)被發(fā)現(xiàn)的其他種有：珊瑚異蟲草 Metacordyceps martialis、粉棒束孢Isaria farinosa、細(xì)腳棒束孢Isaria

4、tenuipes和球孢白僵菌Beauveria bassiana。
　　牯牛降自然保護(hù)區(qū)的主要蟲生真菌包括：大蟬草Tolypocladium cicadae、蟬棒束孢 Isaria cicadae、Polycephalomyces kanzashianus、擬細(xì)線蟲草 Ophiocordyceps gracilioides和線蟲草屬一新種Ophiocordyceps sp.。
　　一直以來，傳統(tǒng)的中草藥Isaria cica

5、dae被認(rèn)為是大蟬草的無性型。通過子囊孢子彈射的方法獲得了大蟬草無性型菌株，其 ITS序列與大蟬草標(biāo)本子座相似度為100％，同時，在人工培養(yǎng)基上成功長出了形態(tài)與野外大蟬草相似的子實體。傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)的結(jié)論都支持將大蟬草歸于Tolypocladium屬，提出大蟬草的新組合名Tolypocladium cicadae(S.Z. Shing) Y.P. Cao&C.R. Li comb. nov.。結(jié)果否定了大蟬草無性型為蟬棒束孢Is

6、aria cicadae。T. cicadae及Tolypocladium屬其他真菌的系統(tǒng)發(fā)育分析顯示T. cicadae有性與無型階段聚為新的一支，且支持率為100%，二者應(yīng)為生活史的兩個不同階段并且為Tolypocladium屬一新成員，與T. paradoxum親緣關(guān)系較近。
　　另外，調(diào)查發(fā)現(xiàn)重寄生現(xiàn)象普遍存在于蟲草屬真菌中。報道了大蟬草和 P. kanzashianus的重寄生菌Polycephalomyces sp.以

7、及下垂線蟲草的兩個重寄生菌枝多頭霉 P. ramosus和 Polycephalomyces sp.1，其中 P. ramosus為安徽新記錄種；Polycephalomyces sp.和 Polycephalomyces sp.1均為新種。通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分析了Polycephalomyces屬內(nèi)各種之間的發(fā)育關(guān)系，結(jié)果顯示：大蟬草和P. kanzashianus的重寄生菌Polycephalomyces sp.聚為一支，并且支持率

8、為100%，二者應(yīng)屬于同一物種；下垂線蟲草的重寄生菌P. ramosus和Polycephalomyces sp.1彼此獨(dú)立，后者與P.yunnanensis（未發(fā)表種）聚在一起，二者親緣關(guān)系十分密切。GenBank中相關(guān)種的ITS序列與拉丁名可能有誤。
　　大蟬草RCEF6202菌株發(fā)酵液乙酸乙酯提取物對黑曲霉、白色念珠菌均顯示出較高的抑制作用，并運(yùn)用高效液相色譜檢測方法排除了其中含有環(huán)孢菌素類的可能性。其菌絲體和子實體均未表現(xiàn)