菌株P(guān)NR2次生代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與抗菌活性研究.pdf

1、生物源農(nóng)藥就是利用有益的微生物或微生物的代謝產(chǎn)物制作加工而成，是有益農(nóng)業(yè)微生物應(yīng)用領(lǐng)域中的重要研究對(duì)象。土曲霉（Aspergilluw terreus）是一種普遍存在于自然環(huán)境中的真菌，本文選擇了一株具有較好抑菌活性的土曲霉為研究對(duì)象，菌株編號(hào)為PNR2。將其進(jìn)行固體發(fā)酵，對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，以期找到具有高效抑菌活性的化合物。
　　 菌株：PNR2分離自江蘇省徐州地區(qū)的番茄根圍土壤，該菌對(duì)油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、辣椒疫

2、霉病菌、玉米小斑病菌、棉花枯萎病菌、小麥根腐病菌有良好的拮抗效果；尤其對(duì)油菜菌核病菌和番茄灰霉病菌抑制效果明顯，抑菌半徑分別達(dá)到15 mm、8 mm。為了研究菌株的生物特性及開(kāi)發(fā)價(jià)值，我們對(duì)菌株進(jìn)行了ITS序列同源性分析，形態(tài)學(xué)及部分生理特點(diǎn)鑒定，確定將其歸屬為Aspergillus terreus，NCBI中GenBank登錄號(hào)為FJ842764。
　　 菌株采用以小麥麩皮作為基質(zhì)的固體發(fā)酵，發(fā)酵物用1v：1v的氯仿和甲醇混合

3、液充分萃取，減壓蒸干得到粗提物；再將其經(jīng)甲醇-水系統(tǒng)（85v：15v）除蠟，甲醇-丙酮系統(tǒng)（85v：15v）除鹽后得到305 g浸膏。浸膏的初步分離采用硅膠柱（1500g，200～300目），以甲醇：氯仿的混合溶液為洗脫液，按0:100→1:100→2:100→4:100→8:100→16:100→100:0進(jìn)行梯度洗脫，得到7個(gè)組分，各組分再經(jīng)柱層析、薄層層析（TLC）、高效液相色譜（HPLC）、重結(jié)晶等方法進(jìn)行進(jìn)一步分離純化?；衔?/p>

4、的構(gòu)型測(cè)定結(jié)合了質(zhì)譜（ESI-MS）、二維核磁共振（2D-NMR）等多種光譜技術(shù)，分析確定了其中2種化合物。
　　 化合物1是由組分1經(jīng)過(guò)一次硅膠柱層析得到的組分，經(jīng)丙酮重結(jié)晶得到。結(jié)合化合物1的1H-NMR、HMBC、13C-NMR及DEPT-135圖譜可以推斷該化合物的分子式為C13H14O6，不飽和度為7。再利用該化合物的HMOC譜可以將其平面結(jié)構(gòu)確定為6，8-dihydroxy-3，4，5-trimethyl-1-oxo

5、isochroman-7-carboxylic acid。通過(guò)X射線單晶衍射分析判斷該化合物的手性構(gòu)型為S型，其絕對(duì)構(gòu)型可以確定為（3R，4S）-6，8-dihydroxy-3，4，5-trimethyl-1-oxoisochroman-7-carboxylic acid，即dihydrocitrinone?；衔?是由組分2經(jīng)過(guò)四次硅膠柱層析所得到的組分，將化合物2的1H-NMR圖譜與本實(shí)驗(yàn)室人員分到的細(xì)胞松弛素N的1H-NMR圖譜進(jìn)

6、行比較，發(fā)現(xiàn)兩者的特征峰一致，又經(jīng)過(guò)TLC檢測(cè)，將其確定為細(xì)胞松弛素N（cytochalasin N）。
　　 測(cè)定了化合物1對(duì)19株植物病原菌的活性，包括10株植物病原真菌和9株植物病原細(xì)菌。結(jié)果表明：化合物1對(duì)所測(cè)植物病原細(xì)菌無(wú)抑制作用，對(duì)油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、辣椒疫霉病菌有很好的抑制活性，IC50分別為：0.23、0.56、72.2μg/mL。
　　 其中，化合物1的單晶結(jié)構(gòu)和抑菌活性為首次報(bào)道，化合物2也是