菌株HCCB11876活性代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、放線菌在自然界中廣泛存在，并具有豐富的物種多樣性，同時也具有豐富的遺傳和生態(tài)多樣性，即具有多樣的生存策略和遺傳特性。同時其可產(chǎn)生結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣、生物活性廣泛的次生代謝產(chǎn)物。如今臨床上使用的大量抗生素中，70％的抗菌藥物來源于放線菌，并已從放線菌中發(fā)現(xiàn)了很多已上市的重要藥物，如鏈霉素、達(dá)托霉素、恩拉霉素、雷莫拉寧等抗生素，因此放線菌可作為開發(fā)抗菌藥物最理想的資源。同時也說明了放線菌的次生代謝產(chǎn)物在天然藥物的先導(dǎo)化合物的研究與開發(fā)中具有重要的

2、作用。本論文研究采用了96孔板法和紙片擴散法對菌株發(fā)酵提取液進行抑菌試驗的活性測定，并對部分活性菌株的代謝產(chǎn)物進行了UPLC-MS分析、HPLC-DAD分析及化合物庫的比對，最后對其中一株放線菌的代謝產(chǎn)物進行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定。具體實驗結(jié)果如下：
　　1、本實驗室從1031株土壤放線菌中篩選得到15株活性放線菌，以大腸桿菌的三個靶點篩選模型：PHN678、murG、folp.（PHN678為攜帶PHN678質(zhì)粒的敏感菌株；mur

3、G、folp分別為主要針對細(xì)胞壁合成途徑、葉酸代謝途徑構(gòu)建的兩個敏感菌株）為指示菌，對其進行抗菌活性的篩選。采用96孔板法對其發(fā)酵粗提液進行抑菌活性的測定，最終結(jié)果是初步篩選出具有一定的抗革蘭氏陰性菌活性的菌株；隨后為了驗證以上菌株的活性穩(wěn)定性又采用同樣方法對其發(fā)酵粗提液進行再次篩選，共得到4株活性較強的菌株并對它們作了分子生物學(xué)的菌種鑒定，經(jīng)鑒定這4株菌均為鏈霉菌屬菌株。
　　2、對具有一定活性的菌株HCCB11835的代謝產(chǎn)物

4、進行了UPLC-MS及HPLC-DAD的分析、并結(jié)合了次級代謝產(chǎn)物的化合物庫比對以及文獻檢索的結(jié)果，確定了菌株HCCB11835產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物主要為衣霉素類物質(zhì)，并初步鑒定出其次級代謝產(chǎn)物中的5個化合物分別為Tunicamycin B1、Tunicamycin C1、Tunicamycin B2、Tunicamycin B3、Tunicamycin D。而在其它活性菌株中未能從化合物數(shù)據(jù)庫中發(fā)現(xiàn)匹配度較高的化合物。
　　3、通過對

5、放線菌活性菌株HCCB11876發(fā)酵產(chǎn)物進行分離純化，最終共得到7個醌霉素類的化合物為1-7，其中6和7為兩個新化合物。經(jīng)IR、質(zhì)譜MS和NMR等波譜數(shù)據(jù)分析闡明了這七個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，分別為：Quinomycin A(1)、Quinomycin B(2)、Quinomycin C(3)、Quinomycin E(4)、7-S-Oxide-Quinomycin A(5)、7-S-Oxide-Quinomycin B(或稱Quinomy

6、cin F)(6)，以及7-S-Oxide-Quinomycin C(或稱QuinomycinG)(7)。綜合并比對抗革蘭氏陽性菌活性結(jié)果表明，化合物1-7對金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、糞腸球菌均具有較強的抑制作用，且同系物之間（相差2個CH2基團即分子量相差28）隨著甲基數(shù)的增加相應(yīng)的抑菌圈而逐漸變小，即對以上三株陽性菌株的抑制作用逐漸降低。而且還發(fā)現(xiàn)其中有三個化合物即 Quinomycin A、Quinomycin B