HCCB10124抗真菌活性的初步研究.pdf

1、本論文利用上海來益生物藥物研發(fā)中心篩選得到的一株產(chǎn)廣譜、高活性抗真菌廣：物的HCCB10124菌株，通過紙敏片法測定抗菌譜，發(fā)現(xiàn)其對20余種真菌，其中有些是植物和動物的病原菌，有顯著拮抗作用，另外，對金黃色葡萄球菌和藤黃八疊球菌也有抑制作用；并對對菌絲體提取物進行不同濃度稀釋，進行抗真菌活性的測定，發(fā)現(xiàn)活性很高。根據(jù)16SrDNA序列分析，該菌株與鏈霉菌Streptomyces albireticuli具有99％的序列同源性。

2、在分離純化之前，對鏈霉菌HCCB10124進行發(fā)酵條件和培養(yǎng)基成分進行初步優(yōu)化，以期獲得較高產(chǎn)量的活性代謝產(chǎn)物。優(yōu)化后培養(yǎng)基基本組成成分為：2％葡萄糖、2％可溶性淀粉、4％藥媒、0.04％鉬酸銨、0.4％的碳酸鈣。 檢測了菌絲體提取物及發(fā)酵液上清中生物活性產(chǎn)物對溫度、pH值的穩(wěn)定性；利用捷克八溶劑系統(tǒng)紙色譜的方法對生物活性產(chǎn)物進行了研究，發(fā)現(xiàn)其對溫度、pH值較穩(wěn)定。初步的研究結(jié)果為進一步分離提取打下一定的基礎(chǔ)。 通過pH

3、沉淀、有機溶劑萃取和樹脂吸附、硅膠柱層析、中壓色譜層析等實驗，確定的工作流程為先將發(fā)酵上清液的pH調(diào)至6除去離心未除去的固形物，以大孔吸附樹脂吸附上清液和菌絲體丙酮抽提液，除去色素，不同濃度的乙醇洗脫，洗脫液濃縮，進行硅膠柱層析，以丙酮:甲醇=10:1、5:1、3:1、2:1、1:1、100％甲醇分段洗脫，充分除去色素，對活性物質(zhì)進行初步分離。最后，用中壓色譜進行實驗，除去部分雜質(zhì)，達到對樣品富集和純化的目的。 鑒于鏈霉菌HCC