MiR-216b靶向抑制ABCG1表達對破骨細胞分化、融合及生存的影響.pdf

1、目的：探討miR-216b是否能通過靶向作用于ABCG13'UTR并抑制其表達，觀察過表達或沉默 miR-216b后對破骨細胞分化、融合、生存的影響及相關機制。
　　方法：應用生物學信息分析網（microRNA.org）及在線軟件尋找與ABCG1能靶向結合的 MicroRNAs，分析與預測各物種間 miR-216b的保守性、靶基因、ABCG13'UTR序列及miR-216b ABCG1結合自由能、結合位點等基本信息。不同濃度（0、

2、10、20、40、80nm） miR-216b mimics或miR-216b inhibitor及不同時間（0、12、24、48h）處理細胞，通過 TRAP染色檢測破骨細胞生成情況，計算TRAP陽性成熟破骨細胞數目、直徑及融合核數目；實時定量 PCR檢測ABCG1 mRAN表達水平，Western blot檢測ABCG1蛋白質表達水平。miR-216b mimics、miR-216binhibitor或miR-216binhibito

3、r+ABCG1 siRNA轉染細胞48h后，通過TRAP染色檢測破骨細胞生成情況，計算 TRAP陽性成熟破骨細胞數目、直徑及融合核數目；實時定量PCR檢測ABCG1 mRAN表達水平，Western blot檢測ABCG1蛋白質表達水平，液體閃爍計數儀檢測其膽固醇流出情況。
　　結果：生物學信息分析網及在線軟件分析結果顯示 miR-216b在多物種間具有高度保守性，多個靶標預測網站發(fā)現 miR-216b能與ABCG13'UTR發(fā)生

4、靶向結合并調控其靶標基因的表達。miR-216b能抑制 ABCG1蛋白及 mRNA的表達，且對 ABCG1蛋白表達的調節(jié)具有時間與濃度依賴性，進而增加破骨細胞數目、直徑、融合核數目，促進 RAW264.7巨噬細胞向破骨細胞分化、融合及其生存。miR-216b inhibitor能上調 ABCG1蛋白及 mRNA的表達，且對ABCG1蛋白表達的調節(jié)具有時間與濃度依賴性，進而減少破骨細胞數目、直徑、融合核數目，抑制 RAW264.7巨噬細胞