砷對巨噬細胞和肝細胞膽固醇流出及相關(guān)基因ABCA1和ABCG1表達的影響.pdf

1、目的:流行病學和動物實驗結(jié)果均顯示砷暴露是血脂異常和動脈粥樣硬化的危險因子，膽固醇外流的主要通道蛋白腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCAl)、ABCG1和清道夫受體BI(SR-BI)是維持體內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵因子，在抗動脈粥樣硬化形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用，但砷對膽固醇流出及相關(guān)通道基因的影響并不很清楚。本研究的目的是為了明確砷對巨噬細胞和肝細胞膽固醇流出率及膽固醇流出通道基因表達的影響，為闡明砷導致血脂異常及與動脈粥樣硬化的發(fā)生機制提供理論依據(jù)。

2、
　　方法:THP-1及小鼠原代巨噬細胞培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基中，加入LXR/RXR激動劑（4μg/ml22R-OHC和10μmol/L9-cis-RA）預處理6h，隨后加入終濃度分別為0.625、1.25、2.5和5μM的亞砷酸鈉(NaAsO2)處理18h;L-02肝細胞系及小鼠原代肝細胞培養(yǎng)于DMEM高糖培養(yǎng)基中，以2、4、6、8、16μM NaAsO2處理48h。以LXR/RXR激動劑預處理6h，隨后加入2.5μM N

3、aAsO2處理THP-1細胞48h，隨后在不含砷條件下繼續(xù)培養(yǎng)48h，分別于12、24、36、42、48、60、72、84、96h內(nèi)后收集細胞;12μM NaAsO2處理L-02細胞48h，隨后在不含砷條件下繼續(xù)培養(yǎng)48h，分別于12、24、36、42、48、60、72、84、96h內(nèi)后收集細胞;。定量PCR(qPCR)以及蛋白印跡(Western blot)技術(shù)檢測ABCA1、ABCG1和SR-BI基因表達水平;3H同位素示蹤分析細胞

4、內(nèi)膽固醇流出率。
　　結(jié)果:在THP-1巨噬細胞和小鼠原代巨噬細胞內(nèi)，0.625μM及更高濃度NaAsO2可顯著降低ABCA1 mRNA水平，1.25μM及更高濃度NaAsO2可顯著降低ABCG1 mRNA水平，對SR-BI水平未見顯著影響，ABCA1、ABCG1和SR-BI的蛋白表達水平的變化與基因水平一致，3H同位素示蹤膽固醇，閃爍計數(shù)結(jié)果顯示，在1.25μM及更高濃度NaAsO2可顯著降低膽固醇流出率。在L-02細胞和小鼠原

5、代肝細胞內(nèi)，4μM及更高濃度NaAsO2可顯著提升ABCA1 mRNA和ABCG1 mRNA水平，但對SR-BI水平?jīng)]有顯著性影響，ABCA1、ABCG1和SR-BI的蛋白表達水平的變化與基因水平一致，并且在8μM及更高濃度NaAsO2可顯著提高膽固醇流出率。2.5μM NaAsO2處理THP-1巨噬細胞，在12h后THP-1巨噬細胞內(nèi)ABCA1的表達有顯著性降低，42h時ABCA1的表達達到最低值，降低了約60％，之后不再繼續(xù)降低;去

6、除砷24h后ABCA1的表達量開始增加，到36h后回復到初始水平。2.5μM NaAsO2處理THP-1巨噬細胞24h后膽固醇流出率顯著降低，42h后到最低值，隨后不再繼續(xù)降低;去砷培養(yǎng)24h后膽固醇流出開始增加，到36h后恢復到初始水平。12μM NaAsO2處理L-02細胞，12h后L-02細胞內(nèi)ABCA1的表達就有顯著性的提升，36h時ABCA1的表達達到最高值，增加了約2.5倍，隨后不再隨時間延長也增加;去除砷12h后ABCA1

7、的表達量開始降低，到36h后回復到初始水平。12μMNaAsO2處理L-02細胞24h后膽固醇流出顯著增加，36小時達到峰值，隨后不再增加;去砷培養(yǎng)12h后開始降低，24h恢復到初始水平。THP-1巨噬細胞和L-02細胞的膽固醇流出也具有與ABCA1基因表達一致的時效性。采用t檢測法統(tǒng)計分析不同處理條件下基因表達水平及膽固醇流出率差異， P＜0.05具有顯著性差異。
　　結(jié)論:砷對膽固醇的流出及相關(guān)基因表達的影響具有組織特異性，以