干擾素γ通過(guò)JAK-STAT1途徑抑制細(xì)胞ABCA1表達(dá)及膽固醇流出.pdf

1、目的:干擾素γ(Interferon-γ, IFN-γ)是一種CD4+T細(xì)胞源性免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子,通過(guò)作用于巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞和其他血管細(xì)胞而對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)揮其病理學(xué)作用。本課題組以前的研究發(fā)現(xiàn),IFN-γ能減少THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ATP-binding cassette transporter A1, ABCA1)表達(dá)及膽固醇流出。但是對(duì)其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究至今未見(jiàn)報(bào)道。本研究針對(duì)這一問(wèn)題,以 T

2、HP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞為研究對(duì)象,采用多種實(shí)驗(yàn)方法,探討 IFN-γ減少ABCA1表達(dá)和膽固醇流出的可能機(jī)制。
　　方法: THP-1單核細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)貼壁后,加入oxLDL誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞,經(jīng)各種因素處理后,運(yùn)用液體閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,高效液相色譜分析細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量,用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和Western印跡分析法分別檢測(cè)ABCA1和肝X受體α(liver

3、X receptorα, LXRα)mRNA與蛋白質(zhì)的水平,并采用Western印跡分析法檢測(cè)STAT1磷酸化及細(xì)胞核內(nèi)STAT1水平。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,IFN-γ能在基因和蛋白水平減少ABCA1和LXRα的表達(dá),減少細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出并增加細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量。LXRα特異性激動(dòng)劑22(R)-羥基膽固醇(22(R)-Hch)能減弱IFN-γ下調(diào)ABCA1的作用,而LXRα特異性抑制劑4,4-二異硫氰酸二丙乙烯2,2-二磺酸(D

4、IDS)能增強(qiáng)IFN-γ下調(diào)ABCA1的作用。IFN-γ能引起STAT1發(fā)生磷酸化形成pSTAT1,并增加核內(nèi)STAT1水平。雙面神激酶(Janus kinase,JAK)抑制劑AG-490能減少核內(nèi)STAT1表達(dá),降低IFN-γ下調(diào)LXRαmRNA表達(dá)的作用。AG-490也能減弱IFN-γ下調(diào)ABCA1 mRNA與蛋白質(zhì)水平并減少細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出。
　　結(jié)論:IFN-γ通過(guò)JAK-STAT1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的下調(diào)LXRα水平,從而減