IL-17及JAK抑制劑AG490對(duì)泡沫化巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　白介素-17(Interleukin-17,IL-17)是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)促炎癥細(xì)胞因子,具有致動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的作用,酪氨酸蛋白激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(Janus kinase signal transducers and activators of transcription, JAKs-STATs)是其發(fā)揮作用的途徑之一。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ATP-bi nding

2、 cassette transporter,ABCA1)在細(xì)胞中的主要作用為促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇運(yùn)輸和減少細(xì)胞內(nèi)的炎癥因子。雙面神激酶(Janus kinase,JAK)抑制劑2-氰基-3-(3,4-二羥基苯基)-N-(苯甲基)-2-丙烯酰胺(2-cyano-3-(3,4-dihydroxyp henyl)-N-( phenylmethyl)-2-propenamide,AG490)為JAK抑制劑,能阻斷JAKs-ST ATs信號(hào)通路。本文

3、通過觀察IL-17及AG490對(duì)泡沫化巨噬細(xì)胞ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)情況,探討IL-17及AG490對(duì)泡沫化巨噬細(xì)胞的作用。
　　方法:
　　1.檢測(cè)IL-17對(duì)泡沫化巨噬細(xì)胞ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)情況:THP-單核(Thp-1 monocyte,THP-1)細(xì)胞經(jīng)佛波酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)(100nmol/L)誘導(dǎo)24h-48h形成巨噬細(xì)胞,經(jīng)氧化低密度脂蛋

4、白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)(50μg/mL)泡沫化后建立巨噬細(xì)胞泡沫化模型,油紅O乙醇染液鑒定泡沫化巨噬細(xì)胞。上述泡沫化巨噬細(xì)胞中分別加入IL-17(100ng/mL),不同時(shí)間點(diǎn)(0h,6h,12h,24h)收取細(xì)胞,分別提取RNA及蛋白,RT-PCR、Western blotting檢測(cè)ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)。上述泡沫化巨噬細(xì)胞中加入IL-17(0ng/mL、1ng/

5、mL、10ng/mL、100ng/mL),24h后收取細(xì)胞,分別提取RNA及蛋白,RT-PCR、Western blotting檢測(cè)ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　2.檢測(cè)JAK抑制劑AG490與IL-17對(duì)泡沫化巨噬細(xì)胞ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)情況:IL-17(100ng/mL)及AG490(0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L)共處理泡沫化巨噬細(xì)胞24h后收取細(xì)胞,分別提取RNA及蛋

6、白, RT-PCR、Western blotting檢測(cè)ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.THP-1細(xì)胞呈圓形,懸浮生長(zhǎng),經(jīng)PMA(100nmol/L)誘導(dǎo)24h-48h后成為梭形的貼壁巨噬細(xì)胞,并伸出偽足,ox-LDL(50μg/mL)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞形成泡沫化巨噬細(xì)胞,其特征為脂質(zhì)成份增多,聚集成滴,能被油紅O乙醇染液染成紅色。
　　2.隨著泡沫化巨噬細(xì)胞中IL-17濃度的增加(0ng/mL、1ng

7、/mL、10ng/mL、100ng/mL),RT-PCR、Western blotting檢測(cè)ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)隨著IL-17濃度增加而減少(p<0.05),隨著泡沫化巨噬細(xì)胞中IL-17作用時(shí)間的延長(zhǎng)(0h、6h、12h、24h),RT-PCR、Western blotting檢測(cè)ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)隨IL-17作用時(shí)間增加而減少(p<0.05)。
　　3.JAK抑制劑AG490與IL-17(100ng/m

8、L)共同處理泡沫化巨噬細(xì)胞后, RT-PCR、Western blotting檢測(cè)ABCA1mRNA及蛋白的表達(dá)隨著泡沫化巨噬細(xì)胞中AG490濃度增加(0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L)而增加(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.通過ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞能夠成功構(gòu)建巨噬細(xì)胞泡沫化模型。
　　2.IL-17能夠減少泡沫化巨噬細(xì)胞ABCA1mRAN及蛋白的表達(dá),并呈時(shí)間和濃度依賴性