胱抑素C對(duì)THp-1源性泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCA1表達(dá)的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 THP-1源性泡沫細(xì)胞的制備及鑒定
　　目的：
　　建立THP-1源性泡沫細(xì)胞的制備的最優(yōu)條件及泡沫細(xì)胞的鑒定方法。
　　方法：
　　1.主要溶液的配制方法，包括RPMI-1640培養(yǎng)基、考馬斯亮藍(lán)染液、PBS緩沖液、油紅O液和蘇木素液的配制。2.ox-LDL的制備方法。3.THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)方法。4.巨噬細(xì)胞的泡沫化。5.THP-1源性泡沫細(xì)胞制備過程及鑒

2、定方法。
　　結(jié)果：
　　1.50ng/ml的PMA誘導(dǎo)THP-1源細(xì)胞48h后形成典型的巨噬細(xì)胞（倒置顯微鏡下細(xì)胞成不規(guī)則狀態(tài)，成多角形、棱形等，由懸浮狀態(tài)變?yōu)橘N壁狀態(tài)）。
　　2.50ug/ml的ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞48h后泡沫化為典型的泡沫細(xì)胞（胞漿成泡沫樣改變，細(xì)胞內(nèi)總膽固醇濃度增加，膽固醇脂占總膽固醇含量的60％以上）。
　　結(jié)論：
　　THP-1源性泡沫細(xì)胞制備及鑒定過程操作簡(jiǎn)單，泡沫細(xì)胞模

3、型穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)方法科學(xué)、可靠，為后續(xù)的動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)研究提供了良好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，打下了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　第二部分 CysC對(duì)THP-1源性泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCA1表達(dá)的影響
　　目的：
　　觀察不同濃度CysC對(duì)THP-1源性泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCA1表達(dá)的影響。
　　方法：
　　分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為泡沫細(xì)胞組，不加入任何濃度的CysC干預(yù)。實(shí)驗(yàn)組加入一定濃度的Cy

4、sC干預(yù)，按CysC濃度大小分為10ug/ml組、20ug/ml組、30ug/ml組、40ug/ml組、50ug/ml組和30ug/ml+CysC單克隆抗體組，分別將不同濃度的CysC與泡沫細(xì)胞共培養(yǎng)24h，行油紅O液染色，泡沫細(xì)胞計(jì)數(shù)，ox-LDL酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒測(cè)定THP-1源性泡沫細(xì)胞內(nèi)ox-LDL含量，膽固醇氧化酶終點(diǎn)檢測(cè)法測(cè)定THP-1源性泡沫細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯的含量，并用免疫熒光檢測(cè)法對(duì)30ug/ml組和

5、30ug/ml+CysC單克隆抗體組測(cè)定泡沫細(xì)胞膜上轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCA1表達(dá)情況，同時(shí)與對(duì)照組比較。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度CysC孵育THP-1源性泡沫細(xì)胞24h后，經(jīng)油紅O液染色，實(shí)驗(yàn)組內(nèi)泡沫細(xì)胞形成增加，均高于對(duì)照組(P＜0.05)，但泡沫細(xì)胞形成數(shù)量不與CysC濃度成劑量依賴關(guān)系，30ug/mlCysC組泡沫細(xì)胞數(shù)量最多，40ug/mlCysC組和50ug/mlCysC組泡沫細(xì)胞數(shù)量較30ug/mlCysC組有所

6、減少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細(xì)胞數(shù)量較其他濃度組明顯減少(P＜0.05)，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.實(shí)驗(yàn)組泡沫細(xì)胞內(nèi)ox-LDL含量增加，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但其含量不與CysC濃度成劑量依賴關(guān)系，30ug/mlCysC組泡沫細(xì)胞內(nèi)ox-LDL含量最多，40ug/mlCysC組和50ug/mlCysC組泡沫細(xì)胞內(nèi)ox-LD

7、L含量較30ug/mlCysC組有所減少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細(xì)胞內(nèi)ox-LDL含量較其他濃度組明顯減少(P＜0.05)，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.實(shí)驗(yàn)組泡沫細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量增加，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但其含量不與CysC濃度成劑量依賴關(guān)系，30ug/mlCysC組泡沫細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽

8、固醇酯含量最多，40ug/mlCysC組和50ug/mlCysC組泡沫細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量較30ug/mlCysC組有所減少，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量較其他濃度組明顯減少(P＜0.05)，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.免疫熒光檢測(cè)顯示30ug/mlCysC組泡沫細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯

9、減弱(P＜0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)顯著強(qiáng)于30ug/mlCysC組(P＜0.05)，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.CysC阻礙了THP-1源性泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇的外流，增加了細(xì)胞內(nèi)膽固醇的聚集，促進(jìn)了泡沫細(xì)胞的形成。
　　2.CysC抑制THP-1源性泡沫細(xì)胞ABCA1蛋白的表達(dá)。
　　3.CysC可能通過抑制THP-1源性泡沫