胱抑素C對THp-1源性泡沫細胞內(nèi)膽固醇代謝及轉(zhuǎn)運蛋白ABCA1表達的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述：
　　第一部分 THP-1源性泡沫細胞的制備及鑒定
　　目的：
　　建立THP-1源性泡沫細胞的制備的最優(yōu)條件及泡沫細胞的鑒定方法。
　　方法：
　　1.主要溶液的配制方法，包括RPMI-1640培養(yǎng)基、考馬斯亮藍染液、PBS緩沖液、油紅O液和蘇木素液的配制。2.ox-LDL的制備方法。3.THP-1細胞的培養(yǎng)方法。4.巨噬細胞的泡沫化。5.THP-1源性泡沫細胞制備過程及鑒

2、定方法。
　　結(jié)果：
　　1.50ng/ml的PMA誘導(dǎo)THP-1源細胞48h后形成典型的巨噬細胞（倒置顯微鏡下細胞成不規(guī)則狀態(tài)，成多角形、棱形等，由懸浮狀態(tài)變?yōu)橘N壁狀態(tài)）。
　　2.50ug/ml的ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細胞48h后泡沫化為典型的泡沫細胞（胞漿成泡沫樣改變，細胞內(nèi)總膽固醇濃度增加，膽固醇脂占總膽固醇含量的60％以上）。
　　結(jié)論：
　　THP-1源性泡沫細胞制備及鑒定過程操作簡單，泡沫細胞模

3、型穩(wěn)定，實驗方法科學(xué)、可靠，為后續(xù)的動脈粥樣硬化的相關(guān)研究提供了良好的實驗平臺，打下了堅實的實驗基礎(chǔ)。
　　第二部分 CysC對THP-1源性泡沫細胞內(nèi)膽固醇代謝及轉(zhuǎn)運蛋白ABCA1表達的影響
　　目的：
　　觀察不同濃度CysC對THP-1源性泡沫細胞內(nèi)膽固醇代謝及轉(zhuǎn)運蛋白ABCA1表達的影響。
　　方法：
　　分為對照組和實驗組，對照組為泡沫細胞組，不加入任何濃度的CysC干預(yù)。實驗組加入一定濃度的Cy

4、sC干預(yù)，按CysC濃度大小分為10ug/ml組、20ug/ml組、30ug/ml組、40ug/ml組、50ug/ml組和30ug/ml+CysC單克隆抗體組，分別將不同濃度的CysC與泡沫細胞共培養(yǎng)24h，行油紅O液染色，泡沫細胞計數(shù)，ox-LDL酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒測定THP-1源性泡沫細胞內(nèi)ox-LDL含量，膽固醇氧化酶終點檢測法測定THP-1源性泡沫細胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯的含量，并用免疫熒光檢測法對30ug/ml組和

5、30ug/ml+CysC單克隆抗體組測定泡沫細胞膜上轉(zhuǎn)運蛋白ABCA1表達情況，同時與對照組比較。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度CysC孵育THP-1源性泡沫細胞24h后，經(jīng)油紅O液染色，實驗組內(nèi)泡沫細胞形成增加，均高于對照組(P＜0.05)，但泡沫細胞形成數(shù)量不與CysC濃度成劑量依賴關(guān)系，30ug/mlCysC組泡沫細胞數(shù)量最多，40ug/mlCysC組和50ug/mlCysC組泡沫細胞數(shù)量較30ug/mlCysC組有所

6、減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細胞數(shù)量較其他濃度組明顯減少(P＜0.05)，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.實驗組泡沫細胞內(nèi)ox-LDL含量增加，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但其含量不與CysC濃度成劑量依賴關(guān)系，30ug/mlCysC組泡沫細胞內(nèi)ox-LDL含量最多，40ug/mlCysC組和50ug/mlCysC組泡沫細胞內(nèi)ox-LD

7、L含量較30ug/mlCysC組有所減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細胞內(nèi)ox-LDL含量較其他濃度組明顯減少(P＜0.05)，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.實驗組泡沫細胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量增加，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但其含量不與CysC濃度成劑量依賴關(guān)系，30ug/mlCysC組泡沫細胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽

8、固醇酯含量最多，40ug/mlCysC組和50ug/mlCysC組泡沫細胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量較30ug/mlCysC組有所減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量較其他濃度組明顯減少(P＜0.05)，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.免疫熒光檢測顯示30ug/mlCysC組泡沫細胞ABCA1蛋白表達較對照組明顯

9、減弱(P＜0.05)，30ug/ml+CysC單克隆抗體組泡沫細胞ABCA1蛋白表達顯著強于30ug/mlCysC組(P＜0.05)，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.CysC阻礙了THP-1源性泡沫細胞內(nèi)膽固醇的外流，增加了細胞內(nèi)膽固醇的聚集，促進了泡沫細胞的形成。
　　2.CysC抑制THP-1源性泡沫細胞ABCA1蛋白的表達。
　　3.CysC可能通過抑制THP-1源性泡沫