ox-LDL、荷葉生物堿對THP-1巨噬源性泡沫細胞ABCA1表達的影響.pdf

1、目的:
　　以THP-1單核源性巨噬細胞為研究對象,了解不同濃度氧化低密度脂蛋白(Oxygen-low-densitylipoprotein,ox-LDL)及荷葉生物堿對THP-1單核源性巨噬細胞三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A1(ATP-bindingcassettetransporterA1,ABCA1)表達的影響,進而探討ox-LDL對動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展所起的作用,以及荷葉生物堿是否能預防動脈粥樣硬化的發(fā)生或延緩其發(fā)展。

2、>　　方法:
　　1.以佛波酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)誘導THP-1分化為巨噬細胞,以不同濃度梯度(0,25,50,100mg/L)的ox-LDL干預24h,以熒光實時定量PCR和Westernblot分別檢測不同ox-LDL濃度梯度下THP-l單核源性巨噬細胞株ABCA1的表達。油紅O染色觀察各組細胞。
　　2.以PMA誘導THP-1分化為巨噬細胞,一組為空白對照組,其余四組用

3、50mg/Lox-LDL干預THP-1單核源性巨噬細胞24h后,使其成為泡沫細胞,再以不同濃度梯度(0,25,50,100mg/L)荷葉生物堿干預24h,熒光實時定量PCR和Westernblot印跡法分別檢測不同荷葉生物堿濃度梯度下THP-l巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1的表達。油紅O染色觀察各組細胞。
　　結(jié)果:
　　1.400X光鏡下觀察細胞,明顯可見人單核細胞株THP-1細胞在PMA的誘導下由規(guī)則的圓形懸浮細胞變?yōu)樾?/p>

4、態(tài)不規(guī)則梭形貼壁細胞,并可見大量細胞伸出偽足。隨后用不同濃度的ox-LDL孵育后,經(jīng)油紅O染色,顯微鏡下觀察可見細胞內(nèi)大量脂滴,且脂滴的體積與數(shù)量隨著ox-LDL的濃度的增加而增大。經(jīng)50mg/L的ox-LDL孵育后THP-1源性巨噬細胞成為泡沫細胞,再經(jīng)不同濃度的荷葉生物堿處理,油紅O染色后,光鏡下觀察可見泡沫細胞內(nèi)脂滴隨荷葉生物堿濃度的升高而逐漸減少。
　　2.ABCA1mRNA表達水平改變:①ox-LDL處理組的ABCA1m

5、RNA表達量均較空白對照組升高(P<0.05),ox-LDL組內(nèi)比較,ox-LDL濃度為50mg/L時ABCA1mRNA的表達量最高(P<0.05)。②經(jīng)50mg/L的ox-LDL孵育后成為泡沫細胞(其ABCA1mRNA表達量較空白組降低)。后經(jīng)荷葉生物堿處理,泡沫細胞ABCA1mRNA表達量均升高(P<0.05),但未見與荷葉生物堿劑量有明顯相關(guān)性。
　　3.ABCA1蛋白表達水平改變:①ox-LDL處理組的ABCA1蛋白表達量

6、均較空白對照組升高(P<0.05),ox-LDL組內(nèi)比較,ox-LDL濃度為50mg/L時ABCA1蛋白表達量最高(P<0.1)。②經(jīng)50mg/L的ox-LDL孵育后成為泡沫細胞(其ABCA1蛋白表達量較空白組降低)。后經(jīng)荷葉生物堿處理,泡沫細胞ABCA1蛋白表達量均升高(P<0.05),但未見與荷葉生物堿劑量有明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1.ox-LDL使ABCA1表達上調(diào);ox-LDL使PMA誘導的THP-1單核源性巨