ASA對THP-1巨噬細(xì)胞MMP9、ABCA1、SR-BI表達(dá)的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、阿司匹林(Aspirin)又稱乙酰水楊酸，為經(jīng)典的解熱鎮(zhèn)痛藥，臨床一般用于頭痛、牙痛、肌肉痛、感冒發(fā)熱等鎮(zhèn)痛及抗炎、抗風(fēng)濕，由于它具有抑制環(huán)氧合酶，使與炎癥發(fā)生關(guān)系密切的前列腺素(PG)生成受阻。在炎癥組織中(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化)中有大量的PG，PG與緩激肽等致炎物質(zhì)有協(xié)調(diào)作用，解熱鎮(zhèn)痛藥抑制炎癥反應(yīng)通過抑制PG的合成，從而緩解炎癥。 動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，隨著對其分子生物學(xué)機(jī)制認(rèn)識的深入，學(xué)者們發(fā)

2、現(xiàn)炎癥貫穿于這一多因素疾病的全過程，鑒于它是一種涉及多種炎癥細(xì)胞及炎癥因子參與的慢性炎癥性疾病，已有學(xué)者提出應(yīng)將動脈粥樣硬化更名為“動脈粥樣炎癥”。前列腺素介導(dǎo)局部炎癥并調(diào)節(jié)全身生理反應(yīng)，其合成的限速酶COX在人動脈粥樣硬化斑快內(nèi)大量表達(dá)，目前COX已經(jīng)作為AS防治的新靶點(diǎn)，其表達(dá)情況作為評價藥物有無經(jīng)炎癥機(jī)制抗AS潛能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。在動脈粥樣斑塊中，巨噬細(xì)胞在其斑塊處于主要的支配細(xì)胞，通過介導(dǎo)炎癥介質(zhì)的生成，如基質(zhì)金屬蛋白酶，破壞斑

3、塊的穩(wěn)定性，同時通過其表面受體結(jié)合脂蛋白，促成泡沫細(xì)胞的生成。 結(jié)合阿司匹林的抗炎機(jī)制及其動脈粥樣硬化的炎癥機(jī)制，本課題集中研究COX抑制劑阿司匹林對與動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)的MMP9，以及泡沫細(xì)胞中控制膽固醇流出的ABCA1、SR-BI的調(diào)節(jié)作用，闡明了ASA可能通過抑制MMP9的生成，升高膽固醇流出的調(diào)節(jié)蛋白從而達(dá)到緩解粥樣硬化及其后續(xù)的心血管事件。 在我們的研究中，以人來源的THP-1細(xì)胞株為研究材料，研究

4、了小劑量阿司匹林對MMP9、ABCA1、SR-BI表達(dá)和其功能的影響，并進(jìn)一步研究了其中的了可能作用機(jī)制，其主要方法和結(jié)果簡要如下： 1．采用200nM佛波酯(PMA)將THP-1單核細(xì)胞成功誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，顯微鏡下觀察符合巨噬細(xì)胞的特點(diǎn)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。通過MTT實(shí)驗(yàn)，觀察到了小劑量范圍內(nèi)ASA對THP-1巨噬細(xì)胞的生長不構(gòu)成影響，且不隨濃度和時間發(fā)生變化。 2．采用RT-PCR技術(shù)得到了ASA可以抑制THP-1

5、來源巨噬細(xì)胞中MMP-9 m RNA的表達(dá)，且在1200 μM抑制效果較強(qiáng)，只有對照組表達(dá)量的0.53。 3．采用明膠酶實(shí)驗(yàn)觀察到了THP-1巨噬細(xì)胞MMP9的活性在細(xì)胞培養(yǎng)24h要高于48h，72h，且分別只有24h時活性的0.72，0.56，同時發(fā)現(xiàn)ASA在1200μM后，對其活性具有抑制作用。采用RT-PCR技術(shù)得到了ASA可以抑制THP-1來源巨噬細(xì)胞中MMP-9 m RNA的表達(dá)，且在1200 μM抑制效果較強(qiáng)，只有對

6、照組表達(dá)量的0.53。 4．采用Western蛋白印跡觀察到ASA可抑制NF-kB p65亞基的從胞漿內(nèi)向胞核轉(zhuǎn)移，ASA可能通過抑制NF-kB進(jìn)而抑制MMP9的表達(dá)與活性。 5．ASA能夠刺激THP-1來源巨噬細(xì)胞ABCA1、SR-BI的表達(dá)，并呈現(xiàn)濃度依賴性的升高，在ASA濃度達(dá)到1200μM時候，ABCA1的mRNA和蛋白表達(dá)量和對照組有顯著性差異，其相對表達(dá)達(dá)到1.8和2.1。SR-BI的mRNA和蛋白表達(dá)量和對