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文檔簡介
1、目的：生長分化因子-15（Growth differentiation factor-15，GDF-15）在動脈粥樣硬化斑塊中的巨噬細(xì)胞大量表達(dá)，并具有抑制動脈粥樣硬化的作用，但作用機(jī)制不明。本研究主要探討GDF-15是否通過PI3K/PKCζ/SP1通路上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1）表達(dá)。
方法：將 THP-1細(xì)胞經(jīng)佛波酯(1
2、60nmol/L)誘導(dǎo)形成巨噬細(xì)胞，再加入(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)荷脂形成泡沫細(xì)胞。通過GDF-15濃度梯度及同一濃度(1.5ng/mL)不同時間(0,6,12,24,48h)處理細(xì)胞，液體閃爍計數(shù)法測定細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，高效液相色譜法及油紅O染色檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況；Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)ABCA1蛋白水平，實時定量PCR檢測ABCA1 mRNA水平。分別用PI3
3、K、PKCζ和SP1抑制劑或轉(zhuǎn)染相應(yīng)PI3K、PKCζ和SP1 siRNA預(yù)處理細(xì)胞24 h，再加GDF-15處理，檢測細(xì)胞內(nèi)ABCA1、PI3K、PKCζ和SP1蛋白及磷酸化PKCζ和SP1蛋白水平。
結(jié)果：GDF-15呈時間及劑量依賴性增加THP-1巨噬細(xì)胞ABCA1蛋白和mRNA水平。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)GDF-15激活PI3K、PKCζ和SP1級聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)ABCA1 轉(zhuǎn)錄，上調(diào)細(xì)胞內(nèi) ABCA1蛋白水平，從而增加
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