清熱抗毒口服液制備工藝研究及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立.pdf

1、手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，多發(fā)生于5歲以下兒童，可引起手、足、口腔等部位的皰疹，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。近年來，手足口病頻繁多發(fā)，呈上升趨勢，已成為危害兒童身體健康的急性傳染病之一。目前國內(nèi)外尚無預(yù)防用藥以及西藥特效抗腸道病毒藥物，主要是對癥處理和臟器支持治療。與西藥相比，中藥制劑抗病毒作用雖然緩慢，但是安全系數(shù)高，療效確切，功效全面，無明顯的副作用。針對這種現(xiàn)狀，更加凸顯出中醫(yī)藥辨證治療靈活性、有效性和針對性的優(yōu)勢，繼承和發(fā)揚中醫(yī)藥

2、治療的優(yōu)勢和特色對于提高手足口病的臨床療效至關(guān)重要。
　　經(jīng)過長期臨床實踐，清熱抗毒口服液具有良好的臨床效果。但因傳統(tǒng)煎劑口感稍差、服用量大，不便于小兒服用。本課題旨在探索一種治療小兒手足口病的純中藥制劑——清熱抗毒口服液的制備工藝的優(yōu)化與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，以及質(zhì)量控制的方法。通過正交設(shè)計對清熱抗毒口服液的提取濃縮工藝進行優(yōu)選，提高成方藥材的煎出率，避免了傳統(tǒng)煎劑的弊端，提高了藥物的生物利用度。通過探索清熱抗毒口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立

3、以鹽酸小檗堿為主要活性成分為質(zhì)量控制指標(biāo)的分析方法。通過提取工藝的優(yōu)選及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，為手足口的臨床治療提供新的思路方法，改變目前西醫(yī)治療手足口病無特異性方藥的現(xiàn)狀，并為降低重癥手足口病的發(fā)生率提供有效安全的藥物。
　　第一部分清熱抗毒口服液制備工藝研究
　　目的:通過加權(quán)綜合評分法和正交設(shè)計試驗優(yōu)選處方藥材最佳提取工藝。確定清熱抗毒口服液的最佳制備工藝流程。
　　方法:采用正交設(shè)計方法，以相對密度與鹽酸小檗堿的薄層

4、掃描含量為考察指標(biāo)，考察提取時間、加水量（倍）、提取次數(shù)對提取效果的影響，綜合評分法優(yōu)化實驗數(shù)據(jù)，以確定最佳提取工藝。
　　結(jié)果:以相對密度、鹽酸小檗堿含量為考察指標(biāo)，各因素對綜合評分的影響:加水量對鹽酸小檗堿的提取影響最大，提取次數(shù)次之，提取時間對鹽酸小檗堿的提取影響最小。處方藥材加水煎煮2次，第一次提取加10倍量水，煎煮1小時，第二次提取加8倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.05-1.08的溶液，離心

5、，加入適量的糖漿和苯甲酸鈉，攪勻，灌裝，滅菌，即得。
　　結(jié)論:通過引入加權(quán)綜合評分法和正交設(shè)計優(yōu)選出的制備工藝流程合理、生產(chǎn)過程簡單，節(jié)約成本，可操作性強，切實可行。
　　第二部分清熱抗毒口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立
　　目的:建立采用高效液相色譜法測定清熱抗毒口服液中鹽酸小檗堿的含量測定方法。建立清熱抗毒口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為清熱抗毒口服液提供以鹽酸小檗堿為主要活性成分作為質(zhì)量控制指標(biāo)的分析方法。
　　方法:(1)對處

6、方藥材白茅根、鉤藤、黃連進行了薄層色譜鑒別。(2)高效液相色譜條件的優(yōu)化:選擇合適的固定相、流動相，以及檢測方法等色譜條件，以鹽酸小檗堿色譜峰與其他峰完全分離。(3)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在已確定的色譜條件下，考察待測成分的色譜峰分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。(4)專屬性試驗:檢驗在色譜條件下陰性供試品對樣品是否有干擾。(5)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線:進行最低檢測限試驗、精密度試驗、穩(wěn)定性試驗和重復(fù)性試驗。(6)加樣回收率試驗。(7)樣品含

7、量測定。(8)清熱抗毒口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立。
　　結(jié)果:(1)白茅根、鉤藤、黃連的薄層色譜鑒別陰性無干擾，列入正文，蒲公英的薄層鑒別陰性有干擾，故不列入正文。(2)提取方法:以鹽酸-甲醇(1∶100)為溶劑，超聲40min為最佳提取方法。(3)高效液相色譜條件的優(yōu)化:采用色譜柱為島津C18（4.6×150mm，5μm）;以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(25∶75)為流動相進行洗脫;檢測波長為265nm;流速為1.0ml/

8、min。(4)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在此色譜條件下，鹽酸小檗堿色譜峰的理論塔板數(shù)大于3000，與相鄰色譜峰的分離度大于1.5。(5)專屬性試驗:在上述色譜條件下進樣，陰性對照品對樣品無干擾。(6)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:鹽酸小檗堿進樣量在0.05-5μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9999。(7)最低檢測限試驗:鹽酸小檗堿的最低檢測限為0.025μg/ml。(8)精密度試驗:鹽酸小檗堿的有效峰面積的RSD為0.13％。(9)穩(wěn)定性試

9、驗:鹽酸小檗堿的有效峰面積的RSD為0.6％，樣品在8小時內(nèi)穩(wěn)定。(10)重復(fù)性試驗:以鹽酸小檗堿的峰面積計算所得重現(xiàn)性試驗的RSD為1.8％。(11)加樣回收率試驗:鹽酸小檗堿的平均加樣回收率為101％，RSD為1.86％。(12)樣品含量測定:在所建立的色譜條件下，對不同批次的清熱抗毒口服液中鹽酸小檗堿的含量進行測定，并計算樣品中有效成分的含量。
　　結(jié)論:采用高效液相色譜法測定清熱抗毒口服液中鹽酸小檗堿含量。該方法具有分析時