轉(zhuǎn)染cxcr4基因?qū)撬栝g充質(zhì)干細胞向SDF-1趨化能力的影響.pdf

1、目的：(1)構(gòu)建攜帶cxcr4基因的重組腺病毒載體；(2)將重組腺病毒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，并驗證轉(zhuǎn)染后BMSCs表達CXCR4增加；(3)檢測轉(zhuǎn)染cxcr4基因后的BMSCs向基質(zhì)細胞衍生因子1(stromal cell-derivedfactor-1，SDF-1)的定向趨化能力。 方法：(1)分離培養(yǎng)C57BL/6小鼠BMSCs，并通過利用流

2、式細胞儀檢測其細胞表面標志物CD44和CD34的表達進行鑒定：(2)通過RT-PCR獲取cxcr4基因，亞克隆入pAdTrack-CMV穿梭質(zhì)粒，線性化后與骨架質(zhì)粒pAdeasy-1在BJ5183菌中完成同源重組，篩選并提取重組正確的腺病毒質(zhì)粒，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293細胞包裝出成熟的具有感染活力的腺病毒顆粒，利用穿梭質(zhì)粒中所帶綠色熒光蛋白(Green fluorescence protein，GFP)報告基因進行病毒滴度和感染活力測定；(3)

3、將攜帶cxcr4基因的重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染BMSCs，分別從熒光表達、蛋白表達來驗證轉(zhuǎn)染成功；(4)并通過Transwell趨化實驗來驗證經(jīng)cxcr4基因轉(zhuǎn)染的BMSCs向SDF-1趨化能力強于未轉(zhuǎn)染的BMSCs，并觀察抗CXCR4中和抗體的干預作用。 結(jié)果：(1)成功分離培養(yǎng)及鑒定C57BL/6小鼠BMSCs；(2)成功構(gòu)建重組腺病毒載體pAdEasy-1-cxcr4，測序結(jié)果正確，病毒滴度5.3x1010U/ml；(3)轉(zhuǎn)染c