大鼠肝纖維化發(fā)生過程中肝臟微小RNA-141(miR-141)表達的研究.pdf

1、目的：觀察四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纖維化發(fā)生過程中微小RNA-200家族（miR-200s）成員微小RNA-141(miR-141)在大鼠肝臟的表達變化，探討miR-141在肝纖維化發(fā)生機制中可能的作用。
　　方法：雄性Wistar大鼠64只，隨機分為正常對照2周、4周、6周、8周組，肝纖維化2周、4周、6周、8周組。皮下注射60％CCl4制備肝纖維化模型，分別在造模2周、4周、6周、8周末處死大鼠，測定肝臟指數(shù)、血清谷丙轉(zhuǎn)氨

2、酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量，并觀察肝組織結(jié)構(gòu)改變。采用免疫組化SABC法檢測正常4周、8周組及相應肝纖維化組大鼠肝組織中α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）的表達情況。運用實時熒光定量PCR（Real time-PCR）的方法測定并比較正常4周、8周組及相應肝纖維化組大鼠肝組織中E-鈣粘素（E-cadherin）mRNA及各組大鼠肝組織中miR-141的表達水平。
　　結(jié)果：造模不同時間肝纖維化組大鼠肝臟指數(shù)、血清ALT和

3、AST活性均顯著高于相應正常對照組(P<0.01)。病理學觀察發(fā)現(xiàn)造模4周開始大鼠肝臟纖維結(jié)締組織明顯增多，且隨時間增長纖維化病變逐步加重，在肝纖維化8周組大鼠肝臟中有明顯假小葉形成。免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝纖維化4周、8周組大鼠肝組織中α-SMA主要表達在肝細胞胞漿和纖維間隔組織中，α-SMA陽性表達量較相應正常對照組顯著增加（P<0.01），且隨肝纖維化發(fā)展明顯增加。Real time-PCR結(jié)果顯示，肝纖維化4周、8周組大鼠肝組織E-

4、cadherin mRNA表達量顯著低于相應正常對照組（P<0.05），且隨肝纖維化發(fā)展顯著降低。肝纖維化2周組大鼠肝臟miR-141水平明顯高于相應正常對照組(P<0.05)；肝纖維化4周組大鼠肝臟miR-141水平較相應對照組明顯降低(P<0.01)，且明顯低于肝纖維化2周組(P<0.01)；肝纖維化6周組大鼠肝臟miR-141水平又明顯升高，高于相應正常對照組(P<0.01)及肝纖維化4周組（P<0.01），在肝纖維化8周組大鼠的

5、肝組織中miR-141的表達明顯高于相應正常組(P<0.01)及肝纖維化2周、4周、6周組(P<0.01)。
　　結(jié)論：我們的研究證實在CCl4誘導的大鼠肝纖維化發(fā)生過程中有部分肝細胞發(fā)生了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT），提示部分肝細胞發(fā)生了EMT參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展；肝纖維化發(fā)生過程中大鼠肝臟miR-141的表達水平有明顯的改變，且隨著肝纖維化程度加深而大體呈逐漸升