肝纖維化過程中TLR4在肝臟的表達(dá)及黃芪對肝纖維化的防治作用.pdf

1、全文分為二部分： 第一部分 肝纖維化過程中TLR4在肝臟的表達(dá) [目的]：動(dòng)態(tài)觀察大鼠肝纖維化過程中Toll樣受體4(Toll-like receptor-4，TLR4)蛋白在肝臟的表達(dá)，探討TLR4的表達(dá)與肝纖維化發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 [方法]：采用CCl<,4>皮下注射復(fù)制肝纖維化模型，41只體重相近(230g±20g)的雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組和模型組，模型組又被分為1周組、2周組、4周組、6周組

2、。各組動(dòng)物按設(shè)計(jì)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用乙醚麻醉，在無菌無熱源條件下，進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血和肝組織取材。常規(guī)HE染色觀察肝臟病變；天狼猩紅膠原染色、肝組織羥脯氨酸(HYP)含量測定觀察肝纖維化程度；產(chǎn)色基質(zhì)偶氮法鱟試劑定量測定血漿內(nèi)毒素；賴氏法測定血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)；免疫組化檢測TLR4在肝組織中的細(xì)胞表達(dá)分布情況，檢測a-SMA觀察活化的肝星狀細(xì)胞(HSCs)；Western-blot檢測肝纖維化過程中TLR4在肝臟表達(dá)量的變化情況。

3、 [結(jié)果]：實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化過程中： 1.血漿內(nèi)毒素含量梯度上升，CCl<,4>作用4周時(shí)，肝組織膠原纖維及羥脯氨酸含量開始明顯增多； 2.免疫組化結(jié)果顯示，正常大鼠肝組織有微弱的TLR4表達(dá)，CCl<,4>作用1周后肝組織TLR4的表達(dá)即明顯增強(qiáng)，之后持續(xù)高表達(dá)，陽性細(xì)胞包括枯否細(xì)胞、活化的肝星狀細(xì)胞及少量的肝細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等； 3.Western-blot結(jié)果顯示，肝組織TLR4的含量從CCl<,4

4、>作用1周時(shí)開始升高，2周時(shí)達(dá)到高峰，4周時(shí)明顯下降但仍高于正常對照組。 [結(jié)論]：在CCh誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性肝纖維化過程中： 1.隨著腸源性內(nèi)毒素血癥的形成，肝組織中內(nèi)毒素受體TLR4蛋白亦明顯增加。 2.纖維化過程中高表達(dá)的TLR4主要源于枯否細(xì)胞和活化的肝星狀細(xì)胞。 3.血漿內(nèi)毒素含量梯度性上升，但肝組織TLR4蛋白的含量呈先升后降的變化，提示TLR4可能在CCl<,4>所引起的慢性肝纖維化中起重要作用，

5、但TLR4的高表達(dá)并非單純由內(nèi)毒素所致的受體上調(diào)效應(yīng)。 第二部 分黃芪對肝纖維化的防治作用 [目的]：觀察黃芪抗肝纖維化作用，初步探討黃芪抗肝纖維化的機(jī)制。 [方法]：72只體重相近(230g±20g)的雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組，模型組和黃芪注射液組，這兩組又被隨機(jī)分為1周、2周、4周和6周組。黃芪組各組大鼠在給40％cch的同時(shí)給予黃芪注射液(800mg&g/d)皮下注射。各組動(dòng)物按設(shè)計(jì)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束

6、時(shí)，用乙醚麻醉，在無菌無熱源條件下，進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血和肝組織取材。常規(guī)HE染色觀察肝臟病變，天狼猩紅膠原染色、肝組織羥脯氨酸(HYP)含量測定觀察肝纖維化程度；產(chǎn)色基質(zhì)偶氮法鱟試劑定量測定血漿內(nèi)毒素，賴氏法測定血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)；TBA法檢測肝組織丙二醛(MDA)的水平，免疫組化和Western-blot檢測黃芪對肝纖維化過程中TLR4在肝臟表達(dá)的影響。 [結(jié)果]：黃芪組與模型組相比較： 1.肝臟的損傷性改變

7、有不同程度的減輕； 2.血漿內(nèi)毒素含量、ALT及肝組織MDA均有不同程度的降低； 3.4周時(shí)肝組織HYP即開始明顯降低，6周時(shí)肝纖維化指數(shù)(FI)也表現(xiàn)出明顯降低； 4.TLR4在肝臟表達(dá)呈先升高后降低(1周升高，2周和6周時(shí)降低)，且與血漿內(nèi)毒素改變無相關(guān)性。 [結(jié)論]： 1.黃芪可減輕CCl4所致肝臟組織損傷，延緩肝纖維化的發(fā)生與發(fā)展。 2.黃芪的抗肝纖維化可能與其減緩腸源性內(nèi)毒素血癥