AcSDKP在ACEI抗大鼠肝纖維化中的作用.pdf

1、背景與目的：肝纖維化是肝臟受到慢性損傷時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）可逆性沉積的創(chuàng)傷愈合過(guò)程。肝內(nèi)局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system，RAS）激活是肝星狀細(xì)胞激活、肝纖維化和肝硬化的重要機(jī)制。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）是控制RAS系統(tǒng)活性的關(guān)鍵酶。ACE抑制劑（ACE inhibitor，ACEI）及血管

2、緊張素受體阻滯劑（angiotensin receptor blocker，ARB）可抑制AT-Ⅱ合成或受體后信號(hào)通路，影響肝星狀細(xì)胞細(xì)胞活化及其自分泌、旁分泌作用（分泌AT-Ⅰ及表達(dá)AR-1受體上調(diào)），并可抑制α-平滑肌肌蛋白收縮（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）從而改善門脈高壓癥等。RAS還可調(diào)控轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor beta，TGF-β）-Smads信

3、號(hào)系統(tǒng)活性，這一信號(hào)系統(tǒng)功能紊亂是目前公認(rèn)的肝纖維化關(guān)鍵機(jī)制之一。ACEI能夠改善肝纖維化。但其抗肝纖維化作用并不能完全歸結(jié)于對(duì)血管緊張素Ⅱ或其受體的影響。研究發(fā)現(xiàn)N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸（N-acetyl-Seryl-aspartyl-lysyl-proline，AcSDKP）是ACE的N端活性位點(diǎn)的特異性底物。AcSDKP是ACEI抗心臟和腎臟纖維化功能的構(gòu)成要素。AcSDKP和其前體胸腺素β4（thymosin

4、β4，Tβ4）在人體及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的器官和體液內(nèi)均有表達(dá)。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)給予外源性AcSDKP治療對(duì)四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠的肝功能有改善作用，其機(jī)制可能是抑制HSC增殖和活化，并促進(jìn)ECM的降解。因此，我們推測(cè)AcSDKP可能在ACEI抗肝纖維化機(jī)制中扮演重要角色。本研究試圖通過(guò)觀察AcSDKP和其前體Tβ4在CCl4所致大鼠肝纖維化模型以及ACEI干預(yù)后肝組織中的含量變化，

5、評(píng)價(jià)其在抗肝纖維化中的作用，并為進(jìn)一步研究AcSDKP在ACEI抗肝纖維化中的具體作用機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。 方法：取雄性SD大鼠39只，隨機(jī)分為6組，2周正常對(duì)照組和模型組各6只，6周正常對(duì)照組和模型組各6只，6周正常加ACEI干預(yù)組6只和模型加ACEI干預(yù)組9只作為對(duì)照。各模型組給予腹部皮下注射40% CCl4溶液（0.3ml/100g體重），首劑加倍，3天一次。分別注射至2周和6周末。各正常對(duì)照組給予皮下注射100%橄欖油，注

6、射日期、部位、劑量與飼養(yǎng)時(shí)間與模型組相同。6周正常加ACEI干預(yù)組6只：按正常組給予橄欖油，同時(shí)每天給予濃度為3g/L的卡托普利混懸液以100mg/kg的劑量灌胃，共6周；6周模型加ACEI干預(yù)組（9只）：按模型組劑量給予CCl4，同時(shí)每天給予與正常組相同的卡托普利灌胃，共6周。以上6組分別按預(yù)期于2周和6周末采集血清和肝臟標(biāo)本。測(cè)定肝功能指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶

7、（aspartate aminotransferase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatas，AKP）、清蛋白（album，ALB）、總膽紅素（total bilirubin，TBIL）和凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）；采用ELISA法檢測(cè)纖維化血清標(biāo)志物透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、Ⅲ型前膠原（procollagen-Ⅲ，PCⅢ）、Ⅳ型膠原（collagen-Ⅳ，CI

8、V）；采用ELISA法檢測(cè)肝組織勻漿AcSDKP、采用熒光實(shí)時(shí)定量多聚酶聯(lián)反應(yīng)（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）法測(cè)定肝組織Tβ4mRNA以評(píng)價(jià)AcSDKP、Tβ4mRNA在肝纖維化中的動(dòng)態(tài)變化，并分析它們與肝纖維化之間的關(guān)系。 結(jié)果：在2周和6周組動(dòng)物中，與正常對(duì)照組相比，模型組ALT、AST和AKP均升高，PT延長(zhǎng)；卡托普利治療后肝功能中PT和ALB指標(biāo)改善（P<0.01

9、）。與正常對(duì)照組相比，模型組纖維化血清標(biāo)志物HA、PCⅢ、CⅣ含量隨著纖維化進(jìn)而增高，卡托普利治療后肝纖維化指標(biāo)好轉(zhuǎn)（P<0.05）。 與正常對(duì)照組相比，模型組2周時(shí)在Tβ4 mRNA表達(dá)顯著下降（P<0.05）伴肝組織中AcSDKP水平明顯下降，至6周時(shí)Tβ4mRNA水平無(wú)差別，同時(shí)肝組織中AcSDKP維持在低水平；給予卡托普利治療時(shí)，正常大鼠AcSDKP水平升高不明顯，而模型組AcSDKP水平顯著升高。 結(jié)論：肝纖維