抗鼻咽癌單域抗體與硫酸博來(lái)霉素偶聯(lián)物抗腫瘤特性的初步研究.pdf

1、目的:對(duì)抗鼻咽癌噬菌體單域抗體HNSA039特異性進(jìn)行鑒定,構(gòu)建、表達(dá)抗鼻咽癌單域抗體HNSA039和大腸桿菌硫氧還蛋白(TrxA)融合蛋白,并對(duì)融合蛋白與硫酸博來(lái)霉素(BLM)偶聯(lián)物的靶向抗腫瘤特性進(jìn)行初步研究。
　　 方法:利用鼻咽癌細(xì)胞系和非鼻咽癌細(xì)胞系對(duì)單域抗體HNSA039的特異性進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。構(gòu)建單域抗體HNSA039與大腸桿菌硫氧還蛋白(TrxA)融合基因的原核表達(dá)載體pET-21a(+)/TrxA-HNS

2、A039,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。在變性條件下純化融合蛋白。TrxA-HNSA039,進(jìn)行SDS-PAGE電泳鑒定和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)融合蛋白的免疫活性。以葡聚糖T40為中介體偶聯(lián)融合蛋白TrxA-HNSA039與BLM,利用流式細(xì)胞周期分析、MTT、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系(CNE2)和人肺癌細(xì)胞系(A549)的抗腫瘤效應(yīng)。
　　 結(jié)果:通過(guò)對(duì)噬菌體重鏈單域抗體HNSA039

3、的免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定,發(fā)現(xiàn)單域抗體HNSA039與CNE2呈較強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),而與其它人腫瘤細(xì)胞系和正常細(xì)胞系反應(yīng)呈弱陽(yáng)性或不反應(yīng)。成功構(gòu)建的重組表達(dá)載體pET-21a(+)/TrxA-HNSA039,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)形式分析顯示,融合蛋白主要以包涵體的形式存在,SDS-PAGE電泳顯示分子量大約為23KD;ELISA結(jié)果顯示融合蛋白與CNE2具有較好的結(jié)合活性。通過(guò)流式細(xì)胞周期分析、MTT、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TrxA-HNSA039與硫酸

4、博來(lái)霉素偶聯(lián)物(TrxA-HNSA039-BLM)的抗腫瘤活性,結(jié)果顯示偶聯(lián)物的抗腫瘤活性比抗體藥物混合物抗腫瘤活性顯著下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而對(duì)靶細(xì)胞系(CNE2)和人肺癌細(xì)胞系(A549)抗腫瘤活性差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示單域抗體HNSA039具有較好的鼻咽癌細(xì)胞特異性。成功構(gòu)建TrxA-HNSA039的原核表達(dá)載體,然后表達(dá)并純化TrxA-HNSA039融合蛋白。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,融合