殼寡糖對(duì)團(tuán)頭魴頭腎巨噬細(xì)胞免疫功能的影響.pdf

1、殼寡糖是殼聚糖的降解產(chǎn)物，其水溶性好，易吸收，能抗菌、抗腫瘤、提高機(jī)體免疫力。殼寡糖激活如巨噬細(xì)胞、脾臟T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞，活化的免疫細(xì)胞不僅產(chǎn)生活性氧、活性氮等活性物質(zhì)，還能分泌細(xì)胞因子。相關(guān)研究表明，投喂殼寡糖可以增強(qiáng)魚(yú)類的免疫應(yīng)答及抗感染能力，但其具體的作用機(jī)制尚不清楚。因此，本研究通過(guò)體內(nèi)和體外兩種實(shí)驗(yàn)方法，以殼寡糖作為免疫刺激劑探究其對(duì)團(tuán)頭魴頭腎巨噬細(xì)胞免疫功能的影響。主要的研究結(jié)果如下:
　　1、通過(guò)團(tuán)頭魴頭腎巨噬細(xì)

2、胞的分離、純化、鑒定，獲得了純度超過(guò)98％的團(tuán)頭魴頭腎巨噬細(xì)胞。
　　2、殼寡糖刺激巨噬細(xì)胞，吞噬含有GFP的大腸桿菌，通過(guò)熒光顯微鏡觀察和酶標(biāo)儀檢測(cè)殼寡糖組比對(duì)照組吞噬細(xì)菌數(shù)顯著增強(qiáng)，產(chǎn)生活性氧、活性氮、iNOS酶活顯著增強(qiáng)。一氧化氮合酶的mRNA及NADPH氧化酶五個(gè)亞基(p91phox、p22phox、p40phox、p47phox、p67phox) mRNA水平與對(duì)照組相比顯著提高。
　　3、投喂1％殼寡糖一周，投喂

3、組分離的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生活性氧、活性氮及IL-1βmRNA、TNF-α mRNA水平與對(duì)照組相比顯著性增強(qiáng)。
　　4、克隆團(tuán)頭魴一氧化氮合酶(iNOS)基因的全長(zhǎng)序列(Genbank accession NO:KJ668755)全長(zhǎng)4215bp，5'UTR為197bp，3'UTR為775 bp，開(kāi)放閱讀框(ORF)為3243 bp，編碼1080aa。3'末端具有典型的加尾信號(hào)AATAAA和PolyA尾巴。TMpred軟件分析顯示iNO

4、S具有3個(gè)分別由28、25、21個(gè)氨基酸組成的跨膜區(qū)，氨基酸結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示iNOS不存在信號(hào)肽序列，包含4個(gè)主要的結(jié)構(gòu)域，即NOsynthase結(jié)構(gòu)域（位置在80-451）;flavodoxin1結(jié)構(gòu)域(490-621);FAD結(jié)合域(670-897); NAD結(jié)合域(929-1043)。還包括十分保守的血紅素、鈣調(diào)蛋白、四氫生物蝶呤、FAD、FMN、和NADH等輔因子的結(jié)合位點(diǎn)。
　　結(jié)果表明:殼寡糖能夠提高巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬能