優(yōu)良益生菌篩選及利用菌糠生產(chǎn)益生菌制劑研究.pdf

1、隨著抗生素的耐藥性和抗生素殘留問題日益嚴(yán)重，研究和開發(fā)可替代抗生素的綠色飼料添加劑產(chǎn)品已成為世界性的研究課題。微生物制劑具有補(bǔ)充、調(diào)整和維持動物腸道微生態(tài)平衡，達(dá)到防病治病，促進(jìn)健康和提高生產(chǎn)性能的作用。近年來我國食用菌技術(shù)發(fā)展迅速，逐步形成規(guī)?；彤a(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，收菌后剩余底料菌糠的數(shù)量也急劇增加，菌糠內(nèi)富含菌絲體且蘊(yùn)含著豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，合理利用食用菌菌糠成為食用菌行業(yè)需要解決的問題。而利用菌糠生產(chǎn)益生菌制劑為其提供了重要途徑。
　

2、　本研究以本實(shí)驗(yàn)室多年分離并保存的乳酸菌為出發(fā)菌株，從生長性能、產(chǎn)酸性能和耐受性等方面出發(fā)，篩選優(yōu)良乳酸菌;并進(jìn)一步研究篩選獲得的乳酸菌的生長性能、產(chǎn)酸規(guī)律等生物學(xué)特性。以實(shí)驗(yàn)室保存和購買的芽孢桿菌為出發(fā)菌株，從生長規(guī)律、耐受性和產(chǎn)酶能力等方面出發(fā)，篩選獲得優(yōu)良芽孢桿菌;并對其進(jìn)行鑒定和生物學(xué)特性研究。利用菌糠混合培養(yǎng)芽孢桿菌、乳酸菌和酵母菌，采用實(shí)驗(yàn)室小型罐式發(fā)酵，優(yōu)化菌糠發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件，篩選出最佳菌株配伍，并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。主要

3、研究結(jié)果如下:
　　(1)實(shí)驗(yàn)共篩選獲得3株優(yōu)良乳酸菌，分別為植物乳桿菌R02（Lactobacillusplantarum）、糞腸球菌R07（Enterococcus faecalis）和戊糖片球菌R09（Pediococcuspentosaceus）。其中菌株R09生長最快，產(chǎn)酸能力最強(qiáng)，乳酸占總酸含量最高，達(dá)95.45％，可耐受0.12 g/mL NaCl;菌株R02對溫度的耐受性最強(qiáng)，可耐受55℃高溫;菌株R07對強(qiáng)酸強(qiáng)堿

4、環(huán)境有較強(qiáng)的耐受能力，在pH為3.0-9.5的條件下均可生長。在藥敏試驗(yàn)中，菌株R02和R07對抗菌藥物表現(xiàn)出較強(qiáng)的耐受性，而R09表現(xiàn)出極強(qiáng)的耐藥性。
　　(2)篩選獲得3株優(yōu)良芽孢桿菌，分別為解淀粉芽孢桿菌Ba1（Bacillusamyloliquefaciens）;蠟樣芽孢桿菌Bc1（Bacillus cereus）;枯草芽孢桿菌Bs1（Bacillussubtilis）。篩選結(jié)果表明，菌株Bs1和Bc1對高溫、高鹽條件有較

5、好的耐受能力，3株菌對酸堿均有較強(qiáng)的耐受范圍;且3株菌都具有良好的產(chǎn)酶活性;生長曲線測定結(jié)果表明，菌株Bc1、Ba1和Bs1在穩(wěn)定期活菌含量較高，均超過1010 cfu/mL，其中菌株Bc1在穩(wěn)定期的活菌含量最高，達(dá)1014 cfu/mL。菌株Bc1、Ba1和Bs1的皿內(nèi)拮抗試驗(yàn)結(jié)果表明菌株Ba1和Bs1對鏈球菌產(chǎn)生了較強(qiáng)的抑制作用。3株菌均具有較高的SOD酶活力。菌株Bc1對抗菌藥物有較強(qiáng)的耐受性，菌株Ba1和Bs1對大多數(shù)抗菌藥物都

6、很敏感。
　　(3)以乳酸菌R09和芽孢桿菌Bc1為出發(fā)菌株，通過L9(34)正交試驗(yàn)獲得菌糠發(fā)酵的最適培養(yǎng)基配方:菌糠22.5 g，麩皮5.2 g，油渣2.5g，尿素1.2 g。在此條件下乳酸菌R09的活菌數(shù)可達(dá)2.5×109 cfu/g，芽孢桿菌Bc1的活菌數(shù)可達(dá)3.16×1010 cfu/g。
　　通過乳酸菌、芽孢桿菌和酵母菌混菌發(fā)酵，獲得兩組最優(yōu)組合:處理3Bc1+1314+R02+R09和處理5 Ba1+1314+

7、R02+R09。并得出處理3 Bc1+1314+R02+ R09發(fā)酵產(chǎn)物的pH值顯著低于其它菌株組合，發(fā)酵產(chǎn)物中的粗蛋白含量和還原糖含量均顯著高于其它菌株組合，與對照組相比，粗蛋白含量增加了13.4％，還原糖含量增加了108.5％。
　　通過L9(34)正交試驗(yàn)獲得菌糠發(fā)酵的最適發(fā)酵條件，因此通過綜合分析，菌糠發(fā)酵最適發(fā)酵條件為:溫度30℃，初始pH值4.5，料水比2∶2.7，培養(yǎng)時間96 h。在此條件下乳酸菌、芽孢桿菌和酵母菌的

8、活菌數(shù)分別可達(dá)2.0×109 cfu/g，8.71×1010 cfu/g，1.95×108 cfu/g。
　　(4)經(jīng)驗(yàn)證，兩種菌株配伍的乳酸菌和芽孢桿菌活菌數(shù)都達(dá)到1010 cfu/g，各菌株活菌含量均較高，其中菌株配伍Bc1+1314+R02+R09中乳酸菌活菌數(shù)達(dá)4.27×1010 cfu/g，芽孢桿菌活菌數(shù)為8.24×1010 cfu/g，酵母菌為7.08×109 cfu/g; Ba1+1314+R02+R09中乳酸菌活菌