飼用益生菌的篩選及其菌劑制備技術(shù)研究.pdf

1、羅伊氏乳桿菌作為一種重要的動(dòng)物微生態(tài)制劑中的益生菌，其菌體本身及代謝產(chǎn)物能夠抑制仔豬腸道過(guò)路菌和病原菌的粘附及生長(zhǎng)，因此能夠提高仔豬的免疫力和降低仔豬死亡率，從而大大的改善了養(yǎng)殖行業(yè)的質(zhì)量。本課題是從畜禽糞便中有針對(duì)性、目的性地篩選出產(chǎn)酸菌株，且對(duì)其進(jìn)行體外性能評(píng)價(jià)。主要研究如下：
　?。?）飼用益生菌的篩選。經(jīng)過(guò)初篩及耐酸耐膽鹽復(fù)篩，從仔豬糞便中篩選出三株產(chǎn)酸菌株，通過(guò)菌體特征、糖發(fā)酵等生理生化實(shí)驗(yàn)以及分子生物學(xué)鑒定，最后確定其

2、為羅伊氏乳桿菌，且其中耐受性最強(qiáng)的為NCU801。
　　（2）NCU801生長(zhǎng)曲線繪制。羅伊氏乳桿菌NCU801屬于異型發(fā)酵，能夠利用葡萄糖代謝產(chǎn)生乳酸、乙酸，同時(shí)還能夠產(chǎn)生乙醇、二氧化碳等，0-4h、4-16h、16-24h及24h后分別為延滯期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。
　?。?）NCU801的動(dòng)物胃腸道耐受性能研究。L.reuteri NCU801在pH2.5動(dòng)物胃液時(shí)，菌株D值大于60min；通過(guò)模擬動(dòng)物腸液耐受性實(shí)

3、驗(yàn)，菌體在腸液作用4h后，存活率仍有38.6％。在膽鹽濃度為0.3%的改良MRS培養(yǎng)基中作用24h后，活菌數(shù)下降一個(gè)多數(shù)量級(jí)，但活菌數(shù)仍有9.7×105CFU/mL?？梢?jiàn)，L.reuteri NCU801具有較強(qiáng)抵抗動(dòng)物胃腸道逆環(huán)境的能力。
　　（4）NCU801的抑菌性能研究。通過(guò)對(duì)腸道中常見(jiàn)的9種致病菌的抑菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)羅伊氏乳桿菌NCU801的菌體、發(fā)酵液和無(wú)菌上清液均具有抑菌性，且發(fā)酵液和發(fā)酵液的無(wú)菌上清液的抑菌效果較菌體更

4、強(qiáng)，其中發(fā)酵液和無(wú)菌上清液對(duì)大腸埃希氏菌抑制作用最強(qiáng)，抑菌圈直徑達(dá)18mm以上，由此可以判斷出羅伊氏乳桿菌NCU801的抑菌作用主要依賴(lài)于本身的代謝產(chǎn)物。
　　（5）NCU801腸道粘附性能研究。NCU801對(duì)Caco-2細(xì)胞的粘附，其粘附指數(shù)同菌體濃度、菌體發(fā)酵時(shí)間、孵化時(shí)間及pH值都有對(duì)應(yīng)的關(guān)系；而NCU801對(duì)Caco-2細(xì)胞粘附指數(shù)最大值達(dá)（5.08±0.15）CFU/cell。NCU801活菌、死菌均能在置換、競(jìng)爭(zhēng)和排斥

5、性的抑制病原菌對(duì)Caco-2細(xì)胞粘附；其中抑制粘附作用最大的為活菌懸液對(duì)大腸桿菌排斥粘附抑制，抑制粘附率達(dá)86.8±4.5（%）。
　　（6）NCU801高密度培養(yǎng)條件研究。通過(guò)單因素試驗(yàn)，確定了L.reuteri NCU801最佳碳源、氮源、緩沖鹽、無(wú)機(jī)鹽離子分別為葡萄糖、牛肉膏和酵母膏、NaAc、Mg2+；而正交試驗(yàn)優(yōu)化的培養(yǎng)基配方為：牛肉膏1.5%，酵母膏1.5%，葡萄糖5%，MgSO40.06%，MnSO40.01%，Na