玉米根液泡膜鈣依賴蛋白激酶的性質(zhì)及磷酸化作用對(duì)v型h39;atpase的調(diào)節(jié)

1、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文玉米根液泡膜鈣依賴蛋白激酶的性質(zhì)及磷酸化作用對(duì)V型H-ATPase的調(diào)節(jié)姓名：陳碩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳珈2002.5.1蹣、壩：玉水根液泡膜鈣依賴監(jiān)白激酶的性質(zhì)及磷酸化作用對(duì)V 型l q ' - S T P a s e 的調(diào)節(jié)值為6 & 其活性位點(diǎn)朝向胞質(zhì)一側(cè)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以2 5 0 m m o l ／L 的N a C I 對(duì)根進(jìn)行鹽脅迫時(shí)，可導(dǎo)致液泡膜上C D

2、P K 的蛋白量迅速升高，1 5 r a i n 時(shí)達(dá)到最大，以后則開(kāi)始逐漸降低，至6 0 m i n 時(shí)仍然維持在對(duì)照的1 ．4 倍左右，說(shuō)明玉米根在受鹽脅迫1 h的時(shí)問(wèn)叫| ，可能存在C D P K 與膜的結(jié)合然后又脫離的過(guò)程。在完蹩的液泡膜囊泡水平觀察了鈣依賴的磷酸化作用對(duì)V 型H + - A T P a s e 的活性調(diào)節(jié)，發(fā)現(xiàn)已磷酸化的V 型H + ．A T P a s e 的A T P 水解活性和質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)活性均有了較大的提高

3、。而且，用堿性磷酸酶處理磷酸化的液泡膜蛋白，可以使v 型H + - A T P a s e的A T P 水解活性和質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)活性部分復(fù)原。說(shuō)明v 型H + 一A T P a s e 存在磷酸化／脫磷酸化的活性調(diào)節(jié)方式。以硫代磷酸化為模型并引入熒光標(biāo)記，證明v 型H + ．A T P a s e 的A 亞基是液泡膜上可以被磷酸化的蛋白質(zhì)之?。進(jìn)一步使用反相高效液相色譜并結(jié)合電噴霧質(zhì)譜分析A 亞基的磷酸化位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)S e r 5 2 5 是玉

4、米根液泡膜v 型H + ．A T P a s e 的A 亞基的磷酸化位點(diǎn)。這個(gè)位于C 末端的磷酸化位點(diǎn)在各種植物v 型H + - A T P a s e 的A 亞基中的保守性很高，而且其周圍的序列同樣也是保守的，暗示這個(gè)位點(diǎn)的磷酸化／脫磷酸化作用可能是植物界中廣泛存在的v 型一一A T P a s e 活性調(diào)節(jié)的重要方式?！龈鶕?jù)以上結(jié)果可以認(rèn)為，玉米根液泡膜上存在鈣依賴的蛋白激酶( C D P K ) ，而且這種C D P K 在適應(yīng)鹽