膠體金法在hiv抗體檢測中的應(yīng)用_程慶

1、1.DNAmarker(bp)2.陽性對照3.陰性對照4～8.樣本PCR產(chǎn)物3討論喹諾酮類藥物有多種因很多結(jié)構(gòu)含氟也稱為氟喹諾酮類藥物其典型的代表藥物為環(huán)丙沙星。早期研究發(fā)現(xiàn)淋球菌氟喹諾酮耐藥性的發(fā)生與細(xì)菌染色體上氟喹諾酮耐藥性決定區(qū)(QRDR)上DNA螺旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶IV有關(guān)。直到1994年才由美國Belland首次揭示了淋球菌環(huán)丙沙星耐藥性與DNA螺旋酶A亞單位(gyrA基因)和拓?fù)洚悩?gòu)酶IVC亞單位(parC基因)之間的相關(guān)性。

2、DNA螺旋酶是一種Ⅱ型的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶DNA螺旋酶A亞基(GyrA)由gyrA編碼DNA螺旋酶是氟喹諾酮類藥物的主要作用靶位gyrA基因的突變可造成藥物靶位點A亞基發(fā)生改變影響它與藥物結(jié)合的能力使淋球菌表現(xiàn)出對該類藥物的耐受性也是造成淋球菌產(chǎn)生對喹諾酮類耐藥的主要原因DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶IVC亞單位(ParC)由parC基因編碼gyrA和parC位點改變是淋球菌重要的耐藥機制。DNA螺旋酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶是細(xì)菌細(xì)胞生長所必需的酶喹諾酮類藥物抗

3、菌作用的原始靶位是細(xì)菌的DNA螺旋酶(即拓?fù)洚悩?gòu)酶II)通過對抗其酶活性干擾其DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄破壞其DNA結(jié)構(gòu)使細(xì)菌染色體斷裂從而起到殺菌作用。由于編碼DNA螺旋酶A亞基和DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶IVC亞單位的基因發(fā)生點突變形成編碼另一種氨基酸的密碼子而使所編碼的酶亞基發(fā)生氨基酸取代影響到喹諾酮類藥物與靶位的結(jié)合從而影響細(xì)菌對環(huán)丙沙星類藥物的敏感性及耐藥性的出現(xiàn)。本試驗33株淋球菌對環(huán)丙沙星全部耐藥證實了臨汾地區(qū)的淋球菌對環(huán)丙沙星的耐藥率較高。

4、耐環(huán)丙沙星淋球菌都擴增出了gyrA基因QRDR區(qū)域證明QRDR在對環(huán)丙沙星的耐藥中起重要作用。PCR方法對淋球菌的耐藥性進(jìn)行快速檢測克服細(xì)菌培養(yǎng)檢測藥物敏感性需要較長時間的弊端對于促進(jìn)臨床合理應(yīng)用抗生素將具有重要意義。參考文獻(xiàn):[1]王蓓王長嫻糜祖煌.淋球菌對大觀霉素與環(huán)丙沙星耐藥性研究[J].中國公共衛(wèi)生200521(3).[2]謝國艷.淋病奈瑟球菌耐氟喹諾酮類藥物與gyrA和parC基因突變的相關(guān)性研究[J].中國感染與化療雜志20

5、066(2):89.[3]BellandRJMorrisonSGIsonCetal.NeisseriagonorrhoeaeacquiresmutationsinanalogousregionsofgyrAandparCinfluoroquinoloneresistantisolates[J].MolMicrobiol99414:371380.[4]DeguchiTYasudaMNakanoMetal.Rapiddetectionofp

6、ointmutationsoftheNeisseriagonorrhoeaegyrAgeneassociatedwithincreasedsusceptibilitiestoquinolones[J].JclinMicrobiol199634:22552258.(收稿日期:20080316)作者簡介:侯臨平(1972—)女山西臨汾人1997年畢業(yè)于青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院主管檢驗師山西醫(yī)科大學(xué)在職研究生。膠體金法在HIV抗體檢測中的應(yīng)用程慶劉志偉

7、鄭定容(深圳市寶安區(qū)西鄉(xiāng)人民醫(yī)院廣東深圳518102)[摘要]目的:通過ELISA雙抗原夾心法和膠體金法檢測HIV抗體的比較評價膠體金法檢測HIV抗體的效果。方法:用膠體金法和ELISA法檢測HIV抗體。結(jié)果:用ELISA法對11497份待測標(biāo)本進(jìn)行初篩有19份標(biāo)本為陽性用ELISA雙孔實驗和膠體金法對這19份陽性標(biāo)本復(fù)查其中兩者復(fù)查結(jié)果均為陽性5份標(biāo)本未出現(xiàn)ELISA雙孔實驗復(fù)查陽性膠體金法復(fù)查陰性的情況。結(jié)論:抗HIV初篩試驗陽性S

8、CO值≥4.0的標(biāo)本膠體金法代替ELISA雙孔復(fù)查是可行的。[關(guān)鍵詞]HIV抗體檢測ELISA法膠體金法[中圖分類號]R512.91[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B[文章編號]16715098(2008)17220702艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的以細(xì)胞免疫缺陷為主要特征的傳染病。HIV抗體的檢測結(jié)果是HIV感染者和AIDS患者重要的診斷依據(jù)。目前醫(yī)院、疾病預(yù)防控制中心等HIV初篩實驗室普遍采用ELISA

9、法對可疑人群進(jìn)行篩選。本文將初篩實驗陽性的標(biāo)本分別用ELISA雙孔實驗和膠體金法實驗復(fù)查探討用膠體金法代替ELISA雙孔實驗復(fù)查的可行性。1材料和方法1.1材料1.1.1標(biāo)本來源2007年1月至2007年12月期間來我院就診的臨床可疑患者(吸毒者、嫖客、暗娼、賣血員)和孕產(chǎn)婦。1.1.2檢測試劑見表1。表1三種檢測試劑方法試劑品牌批號有效期生產(chǎn)廠家ELISA麗珠2007011020080109珠海麗珠試劑有限公司ELISA科華20061

10、22820071227上?？迫A生物工程有限公司膠體金法科華2007011520080114上海科華生物工程有限公司1.1.3儀器RT2100C酶標(biāo)儀(深圳市雷杜電子有限公司生產(chǎn))、RT2600C洗板機(深圳市雷杜電子有限公司生產(chǎn))和微量加樣器均經(jīng)過校準(zhǔn)儀器性能穩(wěn)定。1.2方法按常規(guī)方法采取被檢測者靜脈血3ml～5ml分離血漿或血清用ELISA法進(jìn)行抗HIV初篩試驗嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。將初篩試驗陽性的標(biāo)本一方面用同種2207實用醫(yī)技

11、雜志2008年6月第15卷第17期(旬刊)JPMTJune.2008Vol.15No.17(IssuedEveryTenDays)試劑進(jìn)行ELISA雙孔實驗復(fù)查同時用膠體金試紙板條復(fù)查(取40μl待測樣本加在試紙板條的加樣區(qū)再在加樣區(qū)的上方加1滴稀釋液30min內(nèi)觀察并記錄結(jié)果)。對比這兩種方法復(fù)查的陽性率。將初篩試驗陽性的標(biāo)本送深圳市疾病預(yù)防控制中心確診。2結(jié)果2.1HIV抗體初篩從11497份標(biāo)本中用ELISA法初篩有19份標(biāo)本陽性

12、兩組A值與臨界值(cutoff)的比值(SCO)范圍見表2。表211497份標(biāo)本初篩陽性結(jié)果SCO值范圍試劑份數(shù)臨界值SCO≥4.0SCO1.0～4.0SCO1.0麗珠69350.23366926科華45620.118～0.230284552合計11497514114782.2HIV抗體復(fù)查將19份初篩陽性的血清標(biāo)本同時用ELISA雙孔實驗和膠體金法復(fù)查結(jié)果見表3。表319份標(biāo)本初篩與復(fù)篩結(jié)果方法SCO≥4.0SCO1.0～4.0初篩(

13、ELISA)514復(fù)篩(ELISA)50復(fù)篩(膠體金法)50確診(免疫印跡法)503討論AIDS的流行已成為人類社會和經(jīng)濟發(fā)展的災(zāi)難全球活著的HIV感染者已超過4300萬人自1985年我國發(fā)現(xiàn)首例AIDS患者以來呈加速流行的趨勢疫情正在從高危人群向一般人群傳播截止到2007年底我國估測存活的HIV感染者超過100萬。因此對HIV感染者的早期診斷便于控制自身疾病的發(fā)展也可以防止傳染給他人。本實驗發(fā)現(xiàn)初篩實驗中SCO比值≥4.0的5份標(biāo)本用

14、膠體金法和ELISA法雙孔實驗復(fù)查均為陽性送深圳市疾病預(yù)防控制中心確診也是陽性?？梢姵鹾Y試驗陽性SCO值≥4.0的標(biāo)本可用膠體金法代替ELISA法雙孔實驗復(fù)查而且膠體金法操作簡單。此外對懷疑是HIV感染的急診手術(shù)前患者采用膠體金法快速檢測HIV抗體可節(jié)省檢測時間以贏得寶貴的手術(shù)時間又可使醫(yī)生在術(shù)中對可疑患者進(jìn)行針對性預(yù)防降低醫(yī)源性HIV感染概率。但對于初篩SCO比值在1.0～4.0之間的標(biāo)本用ELISA雙孔實驗進(jìn)行復(fù)查未出現(xiàn)陽性但在第一

15、次初篩試驗出現(xiàn)假陽性這可能與血清中類風(fēng)濕因子干擾有關(guān)[1]造成ELISA法檢測HIV抗體試驗假陽性。而用膠體金法復(fù)查均為陰性。本著為患者負(fù)責(zé)的原則我們?nèi)詫⒊鹾Y實驗中SCO比值在1.0～4.0之間的標(biāo)本送深圳市疾病預(yù)防控制中心確診最后也確診為陰性。根據(jù)衛(wèi)生部2004年“規(guī)范”中規(guī)定HIV抗體檢測分初篩和復(fù)篩兩個步驟而確認(rèn)試驗(免疫印跡法)操作復(fù)雜、費用昂貴為減少受檢人員的經(jīng)濟支出和實驗人員的工作負(fù)荷要求初篩實驗盡可能的準(zhǔn)確。在臨床工作中經(jīng)

16、典的初篩方法是ELISA法若為陽性再用ELISA雙孔實驗復(fù)查而ELISA雙孔復(fù)查操作繁鎖和耗時長增加了實驗人員的感染機會。因此筆者通過此實驗認(rèn)為:抗HIV初篩試驗陽性SCO值≥4.0的標(biāo)本膠體金法代替ELISA雙孔復(fù)查是可行的。參考文獻(xiàn):[1]許春向呂蛛清.衛(wèi)生化學(xué)[M].第3版.人民衛(wèi)生出版社199310.[2]李宏王哲馬麗萍等.HIV抗體初篩與確認(rèn)(WB)測試結(jié)果對比分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志200313(6):752753.(收

17、稿日期:20080322)實驗室對急性心肌梗死早期診斷指標(biāo)的應(yīng)用及評價常玉梅(解放軍第252醫(yī)院河北保定071000)[摘要]目的:探討實驗室對急性心肌梗死(AMI)早期診斷指標(biāo)為臨床診斷提供有價值的依據(jù)。方法:采用血清肌鈣蛋白(cTnI)和肌紅蛋白(Mb)免疫比濁定量測定法和肌酸激酶同工酶MB(CKMB)活性定量測定法儀器貝可曼對53例AMI患者126例不穩(wěn)定性心絞痛患者和22例骨骼肌損傷患者24例健康對照組檢測結(jié)果進(jìn)行綜合比較分析。

18、結(jié)果:AMI組患者血清cTnI值明顯高于健康對照組差異非常顯著(P0.01)AMI組Mb值顯著高于正常值除骨骼肌損傷組Mb有明顯升高外其他對照組測定值均在正常范圍以內(nèi)與AMI組有明顯差異(P0.01)cTnI及Mb的靈敏性明顯高于CKMB。結(jié)論:Mb是早期首選診斷指標(biāo)cTnI有獨特的特異性和更寬的時間診斷窗cTnI、Mb以及CKMB三項指標(biāo)聯(lián)合檢測在AMI早期診斷起著彼此互補的作用并具有非常重要的臨床意義。[關(guān)鍵詞]急性心肌梗死肌紅蛋白

19、肌鈣蛋白I肌酸激酶同工酶MB[中圖分類號]R542.22[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B[文章編號]16715098(2008)17220802急性心肌梗死(AMI)是發(fā)達(dá)國家最常見的疾病之一發(fā)病率和病死率一直占首位。在我國發(fā)病人數(shù)也在增加并呈低齡化的趨勢因此AMI的早期診斷、治療顯得尤為重要。在以往臨床對心肌缺血性損傷的診斷主要依靠癥狀和心電圖(ECG)大量的臨床實踐發(fā)現(xiàn)約有25%的AMI患者發(fā)病早期可沒有典型的臨床癥狀[1]ECG診斷敏感度僅為50