丙型肝炎病毒抗體膠體金免疫層析法的初步建立.pdf

1、丙型肝炎是一種全球性流行的傳染病，目前全球患病率約3％，約有1.8億人感染丙型肝炎病毒(HepatisCVirus，HCV)，而高度慢性化是該病的最大特征。一般來說，急性HCV感染會顯示亞臨床狀態(tài)，并導(dǎo)致慢性的肝臟疾病，患者常在無意識的情況下延誤治療，從而導(dǎo)致肝硬化和肝細胞癌的發(fā)生。目前國內(nèi)尚無HCV抗病毒特效藥物和相關(guān)疫苗。因此，控制HCV感染的形勢十分嚴峻。目前主要靠早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療來防控HCV傳染源、阻斷傳播途徑，這對HCV

2、的診斷提出較高要求?，F(xiàn)在HCV的前期篩檢主要為檢測血清中的抗體，主要方法包括:酶聯(lián)免疫法、聚合酶鏈反應(yīng)、重組免疫印跡等。膠體金免疫層析方法與之相比，操作簡單、攜帶方便、快速、特異，不需要任何設(shè)備和特殊試劑即可得到檢測結(jié)果，特別適用于現(xiàn)場檢測和診斷。
　　本課題基于膠體金的性質(zhì)及免疫學(xué)原理，研制了一種能夠快速診斷HCV抗體的膠體金免疫層析試紙條。即利用免疫膠體金技術(shù)，選擇使用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，然后用其標記HCV重組抗原制備

3、成金墊，同時將包被抗原與HCV單抗分別作為檢測線與質(zhì)控線蛋白包被硝酸纖維素膜，用于血清中HCV抗體的檢測。
　　為制備出特異性、靈敏度、穩(wěn)定性俱佳的試紙條，在研究過程中，充分考慮了各種影響因素對試紙條品質(zhì)的影響。通過對膠體金制備用水、重組抗原的標記濃度、標記pH值、包被抗原抗體濃度、不同硝酸纖維素膜、不同濕度環(huán)境下對包被的影響、不同粒徑大小的膠體金的靈敏度差異等因素進行摸索與探究，最終確定選擇超純水制備粒徑大小約40nm的膠體金，

4、標記蛋白濃度為20μg/mL，采用SartoriusstedimCN140無背襯膜在40％-60％的環(huán)境濕度下，質(zhì)控線和檢測線分別包被HCV單抗1mg/mL和HCV重組抗原1.5mg/mL，建立HCV膠體金雙抗原夾心法。
　　對制備的試紙條進行特異性、靈敏度、穩(wěn)定性等方面系統(tǒng)檢測，并與ELISA檢測方法進行臨床比較。
　　結(jié)果表明該免疫膠體金試紙條特異性、靈敏度、穩(wěn)定性較好，并方便、快捷，與ELISA法檢測對比陽性率與陰性率