膠體金的性質(zhì)

1、膠體金的性質(zhì)、制備及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用膠體金的性質(zhì)、制備及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用膠體金溶液是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色膠體金作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)始于1971年Faulk等應(yīng)用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌此后他們把膠體金與多種蛋白質(zhì)結(jié)合.1974年Romano等將膠體金標(biāo)記在第二抗體（馬抗人IgG）上，建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega發(fā)現(xiàn)了膠體金

2、標(biāo)記物在光鏡水平的應(yīng)用。膠體金在免疫化學(xué)中的這種應(yīng)用，又被稱為免疫金之后，許多學(xué)者進(jìn)一步證實膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)的生物活性無明顯改變它可以作為探針進(jìn)行細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)多糖、蛋白質(zhì)、多膚、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位也可以用于日常的免疫診斷，進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位，因而在臨床診斷及藥物檢測等方面的應(yīng)用已受到廣泛的重視目前電鏡水平的免疫金染色(IGS)，光鏡水平的免疫金銀染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑點免疫金

3、染色技術(shù)日益成為科學(xué)研究和臨床診斷的有力工具1.1.免疫膠體金技術(shù)的基本原理免疫膠體金技術(shù)的基本原理氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金顆粒由一個基礎(chǔ)金核（原子金Au）及包圍在外的雙離子層構(gòu)成，緊連在金核表面的是內(nèi)層負(fù)離子（AuC12－），外層離子層H則分散在膠體間溶液中，以維持膠體金游離于溶膠間的懸液狀態(tài)。膠體金顆粒的基礎(chǔ)金核并非是

4、理想的圓球核，較小的膠體金顆?；臼菆A球形的，較大的膠體金顆粒（一般指大于30nm以上的）多呈橢圓形。在電子顯微鏡下可觀察膠體金的顆粒形態(tài)。膠體金標(biāo)記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機(jī)理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，可以與葡萄球菌Ａ蛋白、免疫球蛋白、毒素

5、、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immunogoldlabellingtechique)主要利用了金顆粒具有高電子3.3.膠體金的制備膠體金的制備膠體金有多種制備方法，常用的有：檸檬酸三鈉還原法、檸檬酸三鈉－鞣酸混合還原法、白磷還原法、抗壞血酸還原法、乙醇超聲波還原法等。但制備中的一些細(xì)節(jié)問題極大的影響著膠體金的質(zhì)量，應(yīng)予以注意:（1）氯金酸易

6、潮解，應(yīng)干燥、避光保存。（2）氯金酸對金屬有強(qiáng)烈的腐蝕性，因此在配制氯金酸水溶液時，不應(yīng)使用金屬藥匙稱量氯金酸。（3）用于制備膠體金的蒸餾水應(yīng)是雙蒸餾水或三蒸餾水，或者是高質(zhì)量的去離子水。（4）是以制備膠體金的玻璃容器必須是絕對清潔的，用前應(yīng)先經(jīng)酸洗并用蒸餾水沖凈。最好是經(jīng)硅化處理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡數(shù)分鐘，用蒸餾水沖凈后干燥備用。4.4.膠體金的鑒定膠體金的鑒定膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非

7、易事。因此對每次制好的膠體金應(yīng)加以檢定，主要檢查指標(biāo)有顆粒大小，粒徑的均一程度及有無凝集顆粒等。肉眼觀察是最基本也是最簡單和方便的檢定方法，但需要一定的經(jīng)驗。良好的膠體金應(yīng)該是清亮透明的，若制備的膠體金混濁或液體表面有漂浮物，提示此次制備的膠體金有較多的凝集顆粒。在日光下仔細(xì)觀察比較膠體金的顏色，可以粗略估計制得的金顆粒的大小。當(dāng)然也可用分光光度計掃描λmax來估計金顆粒的粒徑。結(jié)制備的膠體金最好作電鏡觀察，并選一些代表性的作顯微攝影，

8、可以比較精確地測定膠體金的平均粒徑。5.5.膠體金的穩(wěn)定性及免疫膠體金的貯存膠體金的穩(wěn)定性及免疫膠體金的貯存膠體金具有很高的動力學(xué)穩(wěn)定性，在穩(wěn)定因素不受破壞時自身凝聚極慢，可放置數(shù)年不發(fā)生凝聚。影響穩(wěn)定的因素主要有電解質(zhì)、溶膠濃度、溫度、非電解質(zhì)等。金溶膠必須有少量電解質(zhì)作穩(wěn)定劑，但濃度不宜過高。高濃度親水性非電解質(zhì)能剝?nèi)ツz粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物質(zhì)促使溶膠凝聚，但一定量的高分子物質(zhì)反而可增加溶膠穩(wěn)定性，如蛋白質(zhì)、葡萄糖、