紫貽貝Mytilus galloprovincialis配子超低溫冷凍保存研究.pdf

1、精子和卵子冷凍保存是一種可以提高基因改良效率，對商業(yè)生產(chǎn)和瀕危物種保存是極其有價(jià)值的技術(shù)。精子卵子的超低溫冷凍保存對海洋漁業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)、低溫生物學(xué)、遺傳育種和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)都具有重要的意義。在水產(chǎn)生物中，卵子冷凍保存技術(shù)的發(fā)展被廣泛認(rèn)為是非常困難的，目前僅在太平洋牡蠣 Crassostrea gigas和紫貽貝Mytilus galloprovincialis中可實(shí)現(xiàn)成功冷凍保存，但在卵子冷凍保存過程中其D型率依然非常低。如何提高冷凍卵子

2、和精子的D型率以及受精卵發(fā)育成稚貝的比例是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
　　本研究以紫貽貝Mytilus galloprovincialis為研究對象，對貽貝精子和卵子進(jìn)行超低溫冷凍保存進(jìn)行了研究。以受精率和D型率為參數(shù)，就收集精子卵子的方法、抗凍劑的種類和濃度、冷凍程序、解凍溫度和平衡時(shí)間等對貽貝卵子和精子超低溫保存效果的影響進(jìn)行了研究。通過以上實(shí)驗(yàn)得出如下結(jié)論：
　?。?）當(dāng)抗凍劑組成為10％乙二醇+7.5%聚蔗糖+0.2%聚乙烯

3、吡咯烷酮，抗凍劑去除液為9%的蔗糖溶液時(shí)，其受精率和D型率最高，分別為42.47%、18.13%。當(dāng)培養(yǎng)到稚貝期，其存活率和生長速度與對照組形似，可以進(jìn)行正常生長發(fā)育。
　?。?）當(dāng)抗凍劑組成為8% DMSO+0.8%的甘氨酸，使用程序型降溫方法進(jìn)行降溫，冷凍速率為-5℃/min，冷凍終濃度為-40℃，解凍溫度為50～60℃時(shí)，冷凍保存精子效果最好，其受精率和D型率分別為90.63%、70.73%。另外，在DMSO中添加甘氨酸可以