紫貽貝（Mytilus edulis）抗菌肽的研究.pdf

1、本論文以紫貽貝Mytilus edulis為原料，系統(tǒng)地研究了酶解液的制備、抗菌肽的分離純化及其基本性質(zhì)，并研究了粗分離抗菌肽在草莓保鮮、鱸魚防腐方面的應(yīng)用。 本論文的研究內(nèi)容包括以下4個部分： 1．研究了不同蛋白酶酶解紫貽貝制備抗菌肽的工藝條件。以紫貽貝為原料，以酶解液抗菌活性為指標(biāo)，通過單酶正交實(shí)驗(yàn)和復(fù)合酶解實(shí)驗(yàn)確定酶解液的最佳制備方案，即選擇Alcalase蛋白酶和菠蘿蛋白酶組成復(fù)合酶，水解工藝及條件為：在55℃，

2、pH8.5下，采用Alcalase蛋白酶水解4h，加酶量300U/g，料水比1:3，然后調(diào)節(jié)pH至5.5，溫度調(diào)節(jié)至50℃，加入菠蘿蛋白酶，加酶量900U/g，酶解3h，料水比1:3。 2．研究了紫貽貝酶解液中抗菌活性肽的分離純化。先用Cellulose-52離子交換柱進(jìn)行分離純化，平衡液為20mmol/l醋酸緩沖液(pH4.5)，流速為0.6ml/min，用0-1.0 mol/l。NaCl溶液進(jìn)行線性梯度洗脫，活性峰C3對枯草

3、芽孢桿菌、大腸桿菌和溶壁微球菌的抑菌圈直徑均超過10mm，活性峰收集后用Sephadex G-25凝膠柱分離，洗脫液為蒸餾水，流速為0.6ml/min，280nm檢測，C3S1洗脫峰對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和溶壁微球菌的抑菌圈分別為13.2mm，10.0mm和14.43mm。收集活性峰，用反相高效液相色譜制備柱純化，0-30min，0-40％乙睛梯度洗脫，流速0.8ml/min，柱溫30℃，檢測波長225nm?；钚苑錍3S1H3對三種菌

4、的抑制作用跟其他洗脫峰相比，存在顯著性差異。收集后用反相高效液相色譜分析柱純化和鑒定，兩次洗脫條件是分別是：0-15min，乙腈0-30％，流速0.8ml/min，柱溫30℃，檢測波長225nm；洗脫峰A1抑菌活性。A1進(jìn)一步用0-15min，乙腈0-20％，流速0.8ml/min，柱溫30℃，檢測波長225nm的條件進(jìn)行純化，活性峰A1A1最后經(jīng)鑒定是一個單一峰，記為MAMP。 3．研究了抗菌肽的基本性質(zhì)。該抗菌肽具有較好的p

5、H和溫度穩(wěn)定性，在60℃-80℃處理20min其抗菌活性基本沒有變化。在pH6.0-8.0的近中性環(huán)境中，紫貽貝抗菌肽的抗菌活性最強(qiáng)。MIC在15.312-61.25 μg/ml之間，對革蘭氏陽性菌的抑制作用要大于對革蘭氏陰性菌的抑制作用，具有較廣的抗菌譜。分子量約為2490Da，經(jīng)過液相純化后的抗菌肽MAMP由12種氨基酸組成，含量較高的三種氨基酸分別是：絲氨酸13.57％，脯氨酸14.66％，半胱氨酸26.03％，其他9種氨基酸含量

6、均在10％以下。 4. 研究了紫貽貝抗菌肽在草莓保鮮、鱸魚防腐方面的應(yīng)用。經(jīng)殼聚糖包膜，山梨酸鉀浸泡、抗菌肽浸泡過的草莓樣品在同樣的貯藏條件下感官指標(biāo)、總酸含量、Vc含量要優(yōu)于空白組。這表明殼聚糖，山梨酸鉀，抗菌肽均對草莓有一定的保鮮作用，且三者的作用依次遞減。通過對不同處理后的鱸魚的感官指標(biāo)、pH、T-VBN、細(xì)菌總數(shù)和K值的測定，結(jié)果顯示殼聚糖，山梨酸鉀，抗菌肽對鱸魚均有一定的防腐作用，殼聚糖的作用較強(qiáng)，山梨酸鉀和粗分離抗菌