超低溫保存脫除香蕉束頂病毒的研究.pdf

1、香蕉束頂病是香蕉生產(chǎn)上的嚴(yán)重病害之一。在生產(chǎn)中推廣無病毒苗是有效控制病毒的方法之一。獲得無病毒母株，常規(guī)脫除病毒主要方法有莖尖脫毒和熱處理。超低溫保存種質(zhì)資源，同時(shí)可以脫除病毒，試驗(yàn)研究超低溫脫除香蕉束頂病的現(xiàn)象。 以感染香蕉束頂病的巴西蕉[ Musa acuminaxe（AAA group）Dwraf Cavendish cv。Baxi]為材料，對(duì)玻璃化法超低溫保存脫除香蕉束頂病毒的方法及原因進(jìn)行了初步研究。試驗(yàn)主要結(jié)果如下：

2、 1．比較了感染香蕉束頂病的巴西蕉吸芽外植體的滅菌及培養(yǎng)方法，發(fā)現(xiàn)多芽外植體采用0．1％升汞滅菌12～14 min，在滅菌率和外植體再生之間可以達(dá)到較好的平衡；外植體萌發(fā)的無菌芽在MS+6—BA4．0 mg/L+NAA0．4 mg/L的培養(yǎng)基上分化較好；無菌芽在MS+6—BA2．0 mg/L+0．2 NAA mg/L的培養(yǎng)基生長較好，葉片濃綠，蕉苗粗壯。 2．香蕉莖尖培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化：發(fā)現(xiàn)莖尖在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行暗培養(yǎng)、

3、置于搖床（110 r/min，25℃）上搖動(dòng)，莖尖培養(yǎng)7d即可伸長0．76 cm，一個(gè)月后增殖系數(shù)達(dá)到1．9，在固體培養(yǎng)基暗培養(yǎng)條件下，莖尖培養(yǎng)7d伸長0．65 cm，且增殖率高達(dá)2．7，這是一個(gè)經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方法。 3．采用石蠟切片方法，觀察了超低溫保存過程中莖尖結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果表明在超低溫保存過程中，莖尖外圍幾層細(xì)胞死亡，有效地減少了香蕉莖尖物理體積，減少了莖尖攜帶病毒的細(xì)胞數(shù)目。分生組織細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)濃厚，自由水含量低，相對(duì)成活率

4、高；這部分莖尖不帶病毒或攜帶病毒濃度低，因此，萌發(fā)出植株的不帶病毒的株數(shù)增加，提高了莖尖的脫毒率。 4．檢測了香蕉束頂病的病毒。Primer up： ATT ACT CGA GCT CGG GAC GGGACAT（65．3℃）：Primer down： TAT ACT CGA GGG GTA ATA ATA TAC CCC（60．5℃）。20μl PCR體系：2 ul10×PCR buffer；0．6μl Taq酶（2U/μl）