柚類種質(zhì)資源超低溫保存體系研究初探.pdf

1、植物種質(zhì)資源的傳統(tǒng)保存形式以田間種植為主，但是其容易受到自然氣候、空間限制和管理經(jīng)費(fèi)短缺等因素的影響，使其應(yīng)用于種質(zhì)資源的長期保存受到限制。近年來基于組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展起來的液氮超低溫保存技術(shù)以其保存穩(wěn)定、效率高、花費(fèi)少等優(yōu)點(diǎn)而被認(rèn)為是目前植物資源長期保存的理想方法。本研究我們以鄂西地區(qū)特有柚類種質(zhì)為試材，進(jìn)行了玻璃化法超低溫保存研究，以期建立起其長期、穩(wěn)定的保存體系，為柚類資源和其他果樹品種的長期保存提供技術(shù)借鑒，所取得的主要結(jié)果如下：

2、1.對柚成年態(tài)莖段的離體培養(yǎng)進(jìn)行了研究。依據(jù)真菌孢子的萌發(fā)特點(diǎn)及不同生長時期對消毒劑敏感性不同的特性，以8月份左右的柚成年態(tài)莖段為試材，試驗建立了一種有效的獲得無菌外植體方法，即將3～4cm長柚莖段用70％酒精消毒30s，0.1％升汞溶液處理20min，材料放置2d后，相同濃度升汞溶液第二次處理20min。無菌水沖洗后，將材料切成0.5cm長帶一腋芽莖段，接種至初代培養(yǎng)基。以這種方法消毒，外植體的污染率大大降低，獲得了85.6％的成功率

3、。對柚腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明莖段腋芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基配方是：MT+BA2.0mg/L+GA30.5mg/L+NAA0.1mg/L+葡萄糖30g/L。待新梢長到1.0～1.5cm長時即進(jìn)行繼代培養(yǎng)，生長正常，其中沒有觀察到愈傷化現(xiàn)象。 2.對柚莖尖玻璃化法超低溫保存的基本條件進(jìn)行了研究，初步建立起柚類莖尖的玻璃化法超低溫保存體系。試驗以高濃度的蔗糖作為滲透性保護(hù)物質(zhì)，以景陽白柚為試材進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)。結(jié)果表明，蔗糖的預(yù)培養(yǎng)方式

4、以0.3M(1d)+0.5M(1d)+0.7M(1d)最好，保存成活率達(dá)81.4％；對玻璃化液(PVS2)的脫水時間和溫度進(jìn)行了研究，宜昌本地柚4號的處理結(jié)果表明其在0℃下脫水20min，可以取得72.2％的保存存活率，顯著高于20℃下的處理；對4個柚品種的莖尖大小對保存成活率的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果以大小為2.0～2.5mm的莖尖平均存活率要高于另外二者(1.0～1.5mm，3.0～3.5mm)，為60.6％。再生植株的生根有效培養(yǎng)基配