姜曲海豬精液超低溫保存的初步研究.pdf

1、精液超低溫冷凍保存，在動物種質(zhì)資源保護等方面已日益顯示出強大的應(yīng)用潛力。關(guān)于精液冷凍保存的技術(shù)方案，在牛和人上應(yīng)用并獲得良好的冷凍效果。迄今為止，豬精液的冷凍保存尚未取得突破性進展，適用于豬精液冷凍保存的技術(shù)方案仍十分有限。因此，建立有效的豬精液冷凍保存技術(shù)平臺依然是當前最為迫切的研究任務(wù)。本研究以姜曲海豬精液為研究對象，以期為建立適合于姜曲海豬精液冷凍保存的技術(shù)方案提供參考，并為其冷凍保存技術(shù)奠定基礎(chǔ)。本試驗共包括以下3個部分：

2、>　　 試驗一、凍前預(yù)處理對冷凍豬精液品質(zhì)的影響以姜曲海豬精液為研究對象，對新鮮精液進行冷凍保存前預(yù)處理，即離心前靜置不同時間、選擇不同的離心速度、離心時間及不同的精清留量等。結(jié)果表明，精液離心前靜置60min再以1000r/min的速度離心，其凍后活率及復(fù)蘇率明顯優(yōu)于靜置15min，30min和90min的凍后活率和復(fù)蘇率(P＜0.05)；采用1000r/min的速度離心時，不同的離心時間均較其它離心速率冷凍-解凍后精液活率高，其差

3、異顯著(P＜0.05)，其中離心10min時，5mL細管凍精的活率和復(fù)蘇率分別為0.46和75.8％，顆粒凍精的活率和復(fù)蘇率分別達到0.45和44.5％；離心后精清的留量，當精液與精清的比例在1/1時，凍后活率及復(fù)蘇率效果優(yōu)于0/1和1/2精清留量(P＜0.05)，細管凍精的活率和復(fù)蘇率與顆粒凍精的凍后活率和復(fù)蘇率無顯著差異(P＞0.05)。
　　 試驗二、冷凍方法、冷凍保護劑對豬冷凍精液品質(zhì)的影響以姜曲海豬精液為研究對象，觀察

4、冷凍方法、冷凍保護劑對豬精液冷凍-解凍后品質(zhì)的影響。結(jié)果表明，當距離液氮面高度為3cm時，3種不同冷凍載體其精液凍后活率及復(fù)蘇率效果分別為0.51、71.8％，0.47、68.5％和0.49、70.5％，優(yōu)于1cm和5cm，且存在顯著差異(P＜0.05)；精液中加入冷凍保護劑后，精子的活率顯著降低(P＜0.05)；各試驗組中，在相同濃度條件下，以加入甘油、Tris和OEP的精子活率顯著高于其它兩組(P＜0.05)，但這3組中精子活率差異

5、不顯著(P＞O.05)，DMSO與乙二醇之間也無顯著差異(P＞0.05)。以甘油作為冷凍保護劑及其濃度在2～4％時冷凍效果較佳，凍后活率達0.35～0.48，尤以3％濃度冷凍-解凍后精液活率最高，可達0.48；0.5mL顆粒法、0.25mL和5mL細管冷凍法差異不顯著(P＞0.05)。
　　 試驗三、解凍方法和解凍溫度對豬冷凍精液品質(zhì)的影響以姜曲海豬精液為研究對象，探索解凍方法和解凍溫度對冷凍-解凍精液品質(zhì)的影響。結(jié)果表明，干解

6、法的精液凍后活率和復(fù)蘇率(0.42和51％)稍高于濕解法(0.38和49％)，但二者不存在顯著差異(P＞0.05)。40℃和50℃水浴中解凍時，其解凍后精子活率和復(fù)蘇率無論是5mL細管法(分別為0.40，55.8％和0.38，50.4％)還是0.25mL細管法(分別為0.48，63.5％和0.42，50.0％)均顯著優(yōu)于22℃和30℃水浴中解凍法(P＜0.05)，但40℃和50℃水浴中解凍后精子活率和復(fù)蘇率均不存在顯著差異(P＞0.05